大量资料证明：海洛因依赖可导致学习记忆能力减退，但学习记忆同时又被证明在成瘾行为的形成和保持中发挥着重要作用。而海洛因依赖中枢机制作为解决临床预防和治疗的关键，至今仍不清楚。本实验试图通过建立海洛因的成瘾模型并对其进行韩氏针刺治疗仪的戒断治疗，从行为学及分子学方面研究韩氏针刺对成瘾学习记忆的影响，初步探讨其作用机制。

　　1 材料和方法

　　1.1 实验动物 健康SD大鼠30只（由重庆第三军医大学实验动物中心提供），雌雄不拘，体重（200±20）g，适应喂养1周后开始造模。

　　1.2 主要仪器 Morris水迷宫(成都泰盟公司)；BI2000图像分析系统（成都泰盟公司）；LH－402型韩氏穴位神经刺激仪（北京力普康医药科技发展公司）。

　　1.3 药品和试剂 海洛因（纯度61.84%,贵州省公安厅提供），盐酸纳洛酮注射液（湖南益侨制药有限公司），NOS测定试剂盒、AchE测定试剂盒、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）。

　　1.4 方法

　　1.4.1 动物模型建立 SD大鼠按逐日递增连续皮下注射海洛因9天，首日剂量3 mg/kg，2次/d（第9天剂量达到27 mg/kg），对照组按同样方式注射等量生理盐水。第10天，对照组和成瘾组各取5只，腹腔注射纳洛酮5 mg/kg，诱发戒断症状（戒断症状包括：湿狗样抖、扭体、伸展、理毛、齿颤、吞咽、直立等），观察30 min，记录它们的次数，并根据文献［1］进行戒断评分，与已建立的海洛因依赖大鼠模型戒断标准比较，确定建模成功。

　　1.4.2 动物分组 随机分为对照组、成瘾组和针刺组，每组10只。成瘾组、针刺组确定模型成功建立后，给予海洛因维持剂量27 mg/kg，1次/d。2天后，30只大鼠同时进行水迷宫成绩测定，成瘾组和对照组大鼠麻醉处死，取海马组织进行NOS及AchE活性测定；而针刺组大鼠进行韩氏针刺仪戒断治疗5天（期间不给予海洛因维持剂量）后，再次进行水迷宫成绩测定，之后亦麻醉处死，取海马组织进行NOS及AchE活性测定。

　　1.4.3 Morris水迷宫测试 Morris水迷宫包括定位航行实验和空间探索实验。定位航行实验历时4天，每天上下午定时各训练1次，检测大鼠找到安全岛的时间（逃避潜伏期），逃避潜伏期越长，其学习记忆能力越差，否则越强。第5天撤除安全岛作空间探索实验，将大鼠从同一入水点放入水中，记录120 s内大鼠跨越安全岛的次数及在原安全岛所在象限的搜索时间，相同时间内跨越安全岛次数越少或在原安全岛所在象限搜索时间越短，则其学习记忆能力越差，否则越强。

　　1.4.4 治疗方法 使用韩氏针刺穴位治疗仪，将其经皮电针刺激改为不锈钢针皮下刺入。针刺组大鼠经乙醚吸入麻醉后，四肢稍加固定，仰卧位于鼠板上，参照大鼠常用的针灸穴位［2］选取双侧的“足三里”（胫骨前结节外侧2 mm处）和“三阴交”（胫骨后内踝上部2 mm处）两穴位，分别插入1对不锈钢针，刺激频率为2 Hz/100 Hz，刺激强度按1-2-3mA递增，每一强度持续10 min，共电针30 min［3］。每日1次，均在上午10点左右进行，连续治疗5天。

　　1.4.5 标本采集及检测 大鼠经25%氨基甲酸乙酯（1.0～1.2 g/kg）腹腔注射麻醉。断头剥取脑组织，在冰盘上取出完整海马，置于冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸吸干，电子天平称重，按1∶10（每克组织中加10 ml冷生理盐水）加生理盐水，眼科剪剪碎后，用超声粉碎机制成10%组织匀浆（匀浆过程始终处于冰水中），低温低速离心机3000 r/min离心15 min，将离心好的匀浆取上清液，弃沉淀。采用考马斯亮兰测定法测定组织中蛋白含量，应用分光光度法测定组织中NOS和AchE含量，组织匀浆中所测物质含量以实测值与总蛋白比值表示。具体操作均按试剂盒说明书进行。

　　1.5 统计学处理 实验数据用SPSS 13.0统计软件统计。所有数据以±s表示。组间比较采用单因素方差分析，方差齐，采用t检验，否则采用秩和检验。P<0.05认为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 行为学检测结果

　　2.1.1 定位航行实验 成瘾组逃避潜伏期较对照组明显延长（P<0.05），而针刺组与成瘾组相比明显缩短（P<0.05）（表1）。 表1 对照组、成瘾组和针刺组大鼠定位航行实验中逃避潜伏期的比较与对照组比较：#P<0.05；与成瘾组比较：*P<0.05

　　2.1.2 空间探索实验 空间探索实验中，成瘾组在第4象限120 s内跨越安全岛的次数及在第4象限的搜索时间较对照组明显下降(P<0.05)；而针刺组较成瘾组明显增加(P<0.05)（表2）。表2 3组大鼠在空间探索实验中的情况比较与对照组比较：#P<0.05；与成瘾组比较：*P<0.05

　　2.2 各组大鼠海马组织中NOS、AchE活性测定 成瘾组海马组织中AchE及NOS活性较对照组明显升高(P<0.05)；而针刺组海马组织中二者活性与非针刺组相比明显下降(P<0.05)（表3）。说明韩氏针刺可有效下调海马AchE活性，增加Ach含量,恢复坏死的神经元，改善学习记忆能力障碍。表3 3组大鼠海马组织中NOS和AchE活性的比较 与对照组比较：#P<0.05，与成瘾组比较：*P<0.05