6 仪器设备
6.1 气相色谱仪,配有氮磷检测器(NPD),色谱数据处理系统
6.2 气相色谱-质谱联用仪
6.3 旋涡振荡器
6.4 台式离心机
6.5 超声波振荡器
6.6 分析天平,万分之一精度
6.7 移液器
6.8 吹干浓缩仪
7 操作方法
7.1 定性分析
7.1.1 毛发清洗
拔取(死后)或尽量紧贴皮肤剪取(活体)毛发0.3~1.0g。将毛发剪成长约2cm碎段,约100mg置小烧杯中,依次用10mL二氯甲烷、10mL水、10mL二氯甲烷各超声2min,自然晾干,装在干净塑料袋内密封后保存于4℃。同时收集最后清洗毛发的二氯甲烷溶液,浓缩后经GC或GC/MS检验毒品呈阴性,确保毛发外部无污染,方可进行以下提取操作,否则重新清洗毛发,直至最后清洗溶液检验呈阴性。
7.1.2 毛发水解
7.1.2.1 酶水解
将洗干净的毛发剪碎至1~2mm左右,准确称取剪碎的毛发30mg,加入0.10mg/mL 4-PBA内标液10?L,加入pH7.6磷酸盐缓冲液2mL,75?L葡醛酸酶/芳基硫酸酯酶溶液,于40℃保温2h。
7.1.2.2 酸水解
将洗干净的毛发剪碎至1~2mm左右,准确称取剪碎的毛发30mg,加入内标0.10mg/mL
4-PBA内标液10?L,加入0.1mol/L HCl溶液1mL,于90℃保温2~3h。
7.1.2.3 碱水解
将洗干净的毛发剪碎至1~2mm左右,准确称取剪碎的毛发30mg,加入内标0.10mg/mL 4-PBA内标液10?L,加入1 mol/L NaOH溶液1mL,于100℃保温15min。
7.1.3 毛发提取
酶水解或酸水解后的毛发冷却至室温,加10%NaOH调pH﹥11(碱水解后的毛发不用调pH值,直接提取),用2.5mL乙酸乙酯×2,混旋10min,离心(5000r/min以上)10min,移取合并有机层加入20μL含1%盐酸的甲醇液,45℃氮气或空气吹干。
7.1.4 衍生化
在上述提取挥干物中,加入30?L乙酸乙酯,30?L三氟乙酸酐或其他合适的衍生化试剂,在微波炉功率为450W下加热2min,或于60℃加热30min,45℃氮气或空气吹干,用50?L甲醇溶解定容,供仪器分析。
当检材中毒品含量较低时,可适当加大检材用量。
7.1.5 控制样品
取空白毛发30mg两份,一份添加0.10mg/mL 4-PBA内标液10?L和混合标准工作液(2)15?L(每毫克毛发添加1ng 苯丙胺、1ng 去氧麻黄碱、1.5ng MDA、1.5ng MDMA)作为检测限添加控制样品,一份做阴性对照,按上述操作与检材毛发平行提取和分析。
7.1.6 分析条件(参考条件)
7.1.6.1 气相色谱仪(GC-NPD)分析条件
色谱柱:(1)HP-5弹性石英毛细管气相色谱柱(或同类型),30m×0.25mm×0.25微米
(2) HP-1701弹性石英毛细管气相色谱柱(或同类型),30m×0.25mm×0.25微米
柱温:170℃(1min)—10℃/min—230℃(0min)—30℃/min—280℃(7min)
进样口温度:280℃
检测器温度:280℃
载气:高纯N2,恒流1mL/min
分流比:1/15
检测器:FID或NPD
FID检测器气体流速:空气300mL/min,氢气30mL/min,尾吹25 mL/min
NPD检测器气体流速:空气175mL/min,氢气4.0mL/min,尾吹25mL/min
7.1.6.2 气相色谱-质谱联用仪(GC/MS)分析条件
色谱柱: HP-5MS弹性石英毛细管气相色谱柱(或同类型),30m×0.25mm×0.25微米
柱温:80℃(2min)—30℃/min—280℃(16.5min)
溶剂延迟时间:3 min
进样口温度:280℃
传输线:250℃
四极杆温度: 200℃
载气:高纯He,恒流1mL/min
分流比:1/20
EI源电子能量:70 eV
质谱扫描范围:40~450amu
扫描方式:SCAN/SIM
检测目标物质谱特征峰:见表1
表1 检测目标物质谱特征峰
7.1.7 检测
7.1.7.1 进样
分别吸取各检材提取(浓缩)衍生液、空白对照提取(浓缩)衍生液、 标准品衍生液各1.0?L,按上述色谱分析条件进样分析。
7.1.7.2 记录和计算
分别记录各试样的保留时间(RT值),或求出各试样的相对保留时间(RRT值),与标准品(衍生物)比对定性。记录空白添加标准品、内标物及标准品(衍生物)的峰面积(或峰高)的平均值,计算空白添加的回收率,评价操作方法的可靠性。
7.2 定量分析
7.2.1 取样