【摘要】 目的 研究缺氧缺血性脑病新生儿血清中β-内啡肽（β-EP）含量及其红细胞免疫功能的变化。方法 选择24例缺氧缺血性脑病新生儿（观察组）和22例正常新生儿（对照组），分别测定他们的血清中的β-EP含量、红细胞补体受体Ⅰ型（complement receptor type I，CR1）数量、红细胞自然免疫粘附肿瘤花环率（the rate of red cell native adhesion to tumor cell，NTRR）。结果 观察组血清中β-EP含量较对照组明显升高（P<0.001）;观察组红细胞CR1数量较对照组差异无显著性（P>0.05）;观察组红细胞自然免疫粘附肿瘤结合率（NTRR）则较对照组明显下降（P<0.001）。观察组中患儿病情越重，血清中β-EP量越高，而NTRR越低。血清中β-EP含量与NTRR值呈负相关关系，相关系数r为-0.79。结论 β-EP对红细胞免疫功能具有双重调节作用，且二者与病情相关。缺氧缺血性脑病新生儿血清β-EP含量应激性增高，故对其红细胞免疫功能产生抑制。

　　关键词 缺氧缺血性脑病 红细胞 补体受体Ⅰ型 自然免疫 肿瘤

　　新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）是由于围生期因素引起的缺氧和脑血流减少或暂停而导致的胎儿和新生儿的脑损伤，足月儿多见，是导致儿童神经系统伤残的常见原因之一。笔者测定了24例HIE新生儿和22例正常新生儿血清中β-EP含量、红细胞自然免疫粘附肿瘤结合率NTRR及红细胞CR1数量，旨在观察HIE新生儿血清中β-EP含量与红细胞免疫功能的变化，并进一步探讨二者之间的关系及二者与病情严重程度的关系。

　　1 资料与方法   

　　1.1 一般资料 观察组:2001年6月～2002年6月我院收治的HIE新生儿24例（按《诸福棠实用儿科学》第6版诊断标准），其中轻度10例，中度8例，重度6例。对照组:正常足月新生儿22例。

　　1.2 方法

　　1.2.1 β-EP的测定 为排除β-EP昼夜节律变化对实验数据的影响，均在早晨6～7时采取静脉血，离心，取血清置-20℃保存待测。采用放射免疫法测定。β-EP放免试剂盒由北京海科锐生物技术中心提供，SN-6978Gamma Counter RIA放免仪测定。

　　1.2.2 红细胞CR1含量的测定 血标本采取EDˉTA抗凝血1ml，经处理后常规用戊二醛固定，-70℃保存待测。用CR1定量ELISA试剂盒（由第二军医大学长海医院免疫室提供），采用王海滨法 ［1］  测定。

　　1.2.3 红细胞自然免疫粘附肿瘤花环率（NTRR）的测定 （1）红细胞悬液的配制:将枸橼酸钠抗凝血1ml（水平离心2000rpm，5min），取沉淀红细胞5μl，加入400μl生理盐水中混匀，浓度为1×10 8 备用。（2）肿瘤细胞悬液的配制:室温溶解肿瘤细胞（即艾氏腹水癌细胞，-20℃保存，由第二军医大学长海医院免疫室提供）洗涤1次（水平离心2000rpm，5min），加入5.5ml生理盐水混匀，浓度为1×10 6 备用。（3）测定方法:将100μl自身血浆置入编号试管，加入红细胞悬液50μl和肿瘤细胞悬液100μl，混匀，37℃，30min，加生理盐水100μl，轻旋转混匀，加50μl固定液，室温固定5min，取此液150μl置载玻片中间，加1滴瑞姬氏染液悬浮涂开至载玻片2/3，阅片，结合5个以上红细胞的肿瘤细胞为1个花环。

　　1.2.4 统计学方法 数据以（ˉx±s）表示，采用t检验，判定差异显著性及相关直线分析方法来判断相关性。

　　2 结果

　　各组测定结果见表1，表2，表3。表1 HIE新生儿血清中β-EP含量与对照组比较 （略）注:与对照组比较P<0.001表2 HIE新生儿红细胞免疫功能与对照组比较（略）注: ˇ 与对照组比较P>0.05， ˇˇ 与对照组比较P<0.001表3 不同组别新生儿血清中β-EP含量和红细胞免疫功能的比较（略）注:ˇ与重症组比较P<0.001，ˇˇ与重症组比较P<0.001观察组血清中β-EP值（50.23±15.37pg/ml）高于对照组（19.078±3.52pg/ml），差异有非常显著性（P<0.001）。观察组红细胞CR1数量（0.776±0.206）与对照组（0.823±0.224）相比差异无显著性（P>0.05）;但观察组红细胞自然粘附肿瘤花环率（NTRR）的值（12.36±3.12%）却较对照组（24.02±4.86%）明显降低，差异有非常显著性（P<0.001）。观察组中、重度组患儿血清中β-EP含量（76.22±19.25pg/ml）明显高于轻度组（32.21±8.12pg/ml）;而红细胞自然粘附肿瘤花环率（NTRR）的值（3.65±1.08%）则明显低于轻度组（19.68±5.32%），差异均有非常显著性（P<0.001）。血清中β-EP含量与NTRR值呈负相关关系，相关系数r为-0.79，见图1。  图1 The correlation between level of  B-EP in serum and NTRR

　　3 讨论

　　自从1981年美国学者Siegel提出”红细胞免疫” 新概念以来，国内外对红细胞免疫的研究不断深入，红细胞表达许多免疫相关因子，对机体免疫功能有重要的调节作用。红细胞作为机体血循环含量最多的血细胞，对其免疫功能的研究，具有与白细胞免疫系统同等重要的意义 ［2］  。红细胞CR1（ECR1，Comˉplement receptor type I expressed on erythrocytes），即红细胞C 3b  /C 4b  受体，是红细胞完成免疫功能的重要物质基础。红细胞膜CR1分子的数量是由染色体共显性基因遗传决定的，位于1号染色体补体激活调节因子区。在人类不同个体之间，红细胞上的CR1种类（F，S或C，D）有不同的构成比例，但就同一个体而言，该构成比却是相对恒定的 ［3］  。

　　在本研究中HIE新生儿红细胞CR1数量与对照组相比无明显差异，而有报道在系统性红斑狼疮、血液病、肾脏疾病和恶性肿瘤患者中，ECR1量减少，这说明ECR1的量与免疫失调及遗传有关，ECR1数量在一般情况下是恒定的，但它的免疫活性却明显受疾病的影响，目前，国内外已有大量报道证明在不同疾病中ECR1活性均有不同程度的下降。在本研究中，虽然与对照组相比，HIE新生儿ECR1数量无明显改变，但红细胞自然粘附肿瘤花环率（NTRR）明显下降。红细胞的免疫粘附活性是通过CR1为基础实现的，这说明ECR1的数量虽然没有改变，但活性却明显下降了。β-EP（β-endorphin）是内源性阿片样物质（EnˉdogenousOpioid-LikeSubstances，OLS）之一，它的前体来自前阿黑皮素（Pro-opiomelanocortin，POMC）。β-EP为神经元内产生，在脑内作抑制性调剂（Nicoll等，1977），是很强的阿片样激动剂，对中枢阿片受体有高度的构相亲和力（Flnley，1981a） ［4］  。β-EP参与体内多种生理病理过程，尤其是在机体应激下激活和过量释放，对机体许多功能产生影响 ［5］  。国外研究证明，人类和实验动物围产期窒息及成人颅脑损伤时，β-EP的含量增高 ［5，6］  。本文结果表明，HIE新生儿血清中β-EP含量均明显高于对照组，且病情越重，血清中β-EP含量越高。提示HIE时，β-EP应激性释放增加，而β-EP作为一种抑制性调剂，它的增加又加重了脑水肿、继发性脑损伤等神经系统损害，说明β-EP可能参与HIE的病理生理过程。

　　神经系统可通过神经突触和内分泌激素控制和调节全身各系统的功能，实验证明它同样可调控免疫系统。这种调控作用主要通过两个方面实现:（1）中枢神经及植物神经的通路调节;（2）神经内分泌调节。β-EP对红细胞免疫功能的调节即属于神经内分泌调节。目前已知红细胞膜上有β-EP受体 ［7］  ，胞内有β-EP。有报道 ［7］  ，一定浓度的β-EP能影响红细胞免疫功能。本实验结果中，HIE新生儿红细胞粘附肿瘤花环率较对照组明显下降，且与β-EP呈负相关关系，即β-EP浓度越高，红细胞粘附肿瘤花环率越低;而β-EP浓度低的患者中红细胞粘附肿瘤花环率反而相对较高。这就证实了β-EP对人的红细胞免疫功能有双重调节作用:当低浓度时，对红细胞免疫功能起促进作用，而高浓度时则起抑制作用 ［8］  。HIE新生儿血清中β-EP浓度升高，而红细胞免疫功能下降。β-EP浓度越高，红细胞粘附肿瘤花环率越低，即患者病情越重，为此，笔者可将β-EP、红细胞免疫功能作为临床上判断病情的一个指标，用以指导临床、评估预后。在治疗方面，目前已有人使用阿片受体拮抗剂纳洛酮（Naloxone）治疗革兰阴性败血症、新生儿窒息收到好的疗效。实验证明纳洛酮能明显增高颅脑损伤后动物血压和脑灌注压，维持脑血供，阻断继发性脑损伤过程。同样可以应用纳洛酮治 疗HIE，具体疗效有待临床进一步探讨。

　　参考文献

　　1 王海滨，张景萍，沈茜，等.红细胞补体受体Ⅰ型的分子定量测定法.中华医学检验杂志，1999，22（6）:342-343.

　　2 王海滨，郭峰.国内外红细胞免疫功能研究的现状与展望.深圳中西医结合杂志，1999，9（5）:3.

　　3 娄世锋，黄宗干.红细胞CR1结构、功能及意义.国外医学临床生物化学与检验学分册，1990，11（5）:5-6.

　　4 张殿明.神经内分泌学.北京:中国医药科技出版社，1991，119-121，386.

　　5 MacDonald MG，Herman BH，Kammerman LA，et al.Cerebrospinal fluid and plasma beta-endorphin-like immunoreactivity in full-term neonates and in preterm neonates with and without apnea of prematurity.Dev Pharmacol Ther，1990，15:8.

　　6 DeBoeck C，Van Reempfs P，Rigatto H，et al.Endorphins and the ventilaˉtory depression during hypoxia in newborn infants.Pediatr Res，1983，17:1723.

　　7 黄盛东，郭峰，孙志扬，等.β-内啡肽对红细胞免疫粘附的促进作用.中国免疫学杂志;7（增刊）:10.

　　8 孙志扬，过宗南，赵孟尧，等.β-内啡肽对正常人红细胞免疫功能的调控研究.上海免疫学杂志，1994，（14）4:200.

　　作者单位:200434上海江湾医院儿科

　　（收稿日期:2004-11-15）