摘要 目的： 探讨褪黑素(melatonin,MT)抑制吗啡戒断反应的作用及其与脑脊液(CSF)和血浆中cAMP含量的关系。方法： 建立吗啡依赖大鼠自然戒断模型，脑室插管及放免测定吗啡依赖大鼠CSF和血浆中cAMP含量。结果： （1）MT对大鼠吗啡戒断反应有明显的抑制作用;(2)吗啡依赖大鼠CSF中(20.07 pmol·ml－1±s 4.62 pmol·ml－1)和血浆中(76.40 pmol·ml－1±s 8.71 pmol· ml－1)cAMP含量均低于正常大鼠,P<0.01； 吗啡戒断大鼠CSF中(38.19 pmol· ml－1±s 6.62 pmol·ml－1)和血浆中(96.65 pmol·ml－1±s 5.32 pmol·ml－1) cAMP含量则明显高于吗啡依赖大鼠,P<0.001;（3）MT可使吗啡戒断大鼠CSF中(23.28 pmol·ml－1±s 4.10 pmol·ml－1)和血浆中 (61.72 pmol·ml－1±s 3.49 pmol·ml－1)cAMP含量明显降低, P<0.01和P<0.001。 结论： MT可抑制大鼠吗啡戒断反应，并与MT降低CSF和血浆中cAMP的含量有关。
    关键词 褪黑素； 吗啡依赖； 吗啡戒断； cAMP

    我们近期的工作表明，提高吗啡依赖大鼠脑中外源性cAMP水平可加重吗啡戒断症状[1],褪黑素(melatonin,MT)可减轻大鼠吗啡戒断症状[2] 。较早的工作证明， MT可通过 ML1 受体与Gi蛋白藕联,抑制腺苷酸环化酶使组织细胞中的cAMP降低[3,4]。本研究旨在探讨MT抑制大鼠吗啡自然戒断反应的机制中,是否与MT抑制大鼠脑内和血液中cAMP的生成有关。

1 材料和方法
1.1 动物与试剂
    SD大鼠52只,♀♂各半，体重在250－280 g之间,由北京大学医学部实验动物科学部提供。盐酸吗啡,青海制药厂生产,批号940704；MT,美国Sigma公司产品,批号944062；cAMP放免试剂盒(3HcAMP)由第二军医大学神经生物学教研室生产,用FJM－182型β计数仪测定脑脊液（CSF）及血浆中cAMP的含量。
1.2吗啡依赖大鼠模型的建立及自然戒断症状的评定
    由背部皮下递增注射吗啡的方法建立吗啡依赖大鼠模型（d1－5吗啡递增注射剂量为5、10、20、40、50 mg·kg－1）,分别在8：00、12：00、16：00不同时间注射,5 d后即可建成。正常对照组和正常大鼠注射MT组则分别注射生理盐水（NS）0.5 ml及MT溶液20 μl。
    吗啡自然戒断症状的评分是直接记录扭体(writhing,WR)、咬牙(teeth chatterling,TC) 、湿抖(wet shakes,WS)、舔阴茎 (penile licking,PL)、逃跑 (escape attempts,EA)等项体征的次数，体重减轻(weight loss,WL)用实际减少的克数来表示。 
1.3 血浆及CSF中cAMP的测定
    采用Gilman蛋白竞争方法测定血浆及CSF中cAMP的含量[5]。事先给大鼠埋植侧脑瘘管并用S_ CAMP－355型衡速推注器进行侧脑室推挽灌流,获取CSF待测。各组大鼠实验完成后立即断头取血，并分离血浆待测。
1.4数据处理
    所有数据以x ±s表示,并用t检验进行统计学处理。

2 结果
2.1 MT对吗啡依赖大鼠自然戒断反应的影响
    取12只大鼠,分为自然戒断组和MT治疗组,每组6只。两组在吗啡依赖模型建立过程中, 均于d6上午8：00停止注射吗啡，自然戒断组腹腔注射（ip）NS 0.5 ml，MT治疗组ip MT(100 mg·kg－1),2 h后开始观察两组各项戒断症状,并将1 h内所观察到的各项戒断症状评分比较,结果显示MT对吗啡依赖大鼠的戒断反应有明显的抑制作用,P<0.05,P<0.01,P<0.001（图1）。
2.2 MT对吗啡戒断大鼠CSF和血浆中cAMP含量的影响
    40只大鼠分为5组，每组8只，依次为正常对照组、吗啡依赖组、自然戒断组、MT治疗组(100 mg·kg－1)、正常大鼠＋MT组(100 mg·kg－1)。各组在实验后按前述方法收集CSF和血浆,并测定CSF及血浆中的cAMP含量,结果显示,吗啡依赖组CSF和血浆中的cAMP含量显著低于正常对照组(P<0.01); 自然戒断组CSF和血浆中的cAMP含量显著高于吗啡依赖组(P<0.001);MT可使自然戒断组的CSF和血浆中的cAMP含量明显降低(P<0.01,P<0.001),见表1。 

3 讨论
    有关吗啡依赖和吗啡戒断反应的发生机制已有许多理论推测及有关实验研究[6－9]。根据MT的镇痛、 镇静、催眠以及增强免疫功能等多种生理功能[10,11],我们曾设计实验探讨MT是否对吗啡戒断反应具有抑制作用,结果发现MT不仅可明显抑制小鼠吗啡戒断跳跃反应,在25、50、100、200 mg·kg－1 的剂量范围内呈剂量效应关系, 而且还可抑制小鼠吗啡戒断所诱发的血液中单胺递质浓度的增加[2]。另外,用神经药理的实验方法增加大鼠脑内外源性cAMP或减少内源性cAMP时,可明显加重或减轻吗啡戒断反应的各项症状[1] 。MT是否通过改变脑中内源性cAMP水平而减轻吗啡戒断反应,我们对此进行了研究。
    本实验首先建立吗啡依赖大鼠模型并确定了MT(100 mg·kg－1)对大鼠吗啡戒断反应的抑制作用,同时用侧脑室推挽式灌流(push－pull perfusion)方法获取CSF以及在实验完备后断头取血并分离血浆,测定CSF及血浆中的cAMP含量。实验结果表明,吗啡依赖大鼠CSF和血浆中cAMP含量均低于正常大鼠；吗啡戒断大鼠CSF和血浆中cAMP含量则明显高于吗啡依赖大鼠。MT可使吗啡戒断大鼠CSF和血浆中cAMP含量明显降低。这些结果均与较早的报道一致[1,6] ,说明大鼠吗啡依赖、吗啡戒断反应的出现与大鼠脑内及血液中cAMP的改变有关,MT抑制大鼠吗啡戒断反应可能是通过MT降低大鼠脑内和血浆中cAMP的含量来实现的。另外,我们近期还有工作证明,提高大鼠中枢内另外一种环核苷酸cGMP同样也可加重大鼠吗啡戒断反应[12] ,本实验证明cGMP的这种作用与提高中枢NO有关。在本实验中所观察到的中枢cAMP的提高可加重大鼠吗啡戒断反应是否也与中枢NO的改变有关,尚需要进一步进行实验研究。

4 参考文献
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INHIBITORY EFFECT OF MELATONIN ON cAMP LEVEL OF CEREBROSPINAL FLUID  AND PLASMA IN MORPHINE WITHDRAWAL RATS

LIAO Zeyun1 QIU Xuecai 2 
1(Department of physiology, Hubei College Nationalinties)
2(Department of Physiology, Peking University Health Science Center, Beijing, 100083)

ABSTRACT Objective: To research the inhibitory effect of melatonin on cAMP level of cerebrospinal fluid and plasma in morphine withdrawal rats. Methods:A physical morphine dependent model in rats was established by subcutaneous injection of morphine in gradually increasing doses (from 5 mg·kg－1 to 50 mg·kg－1). The cerebrospinal fluid (CSF) was gathered by lateral cerebroventricular push－pull perfusion and the plasma was gathered from carotid arteria after each experiment. cAMP contents in CSF and plasma were determined by radioimmunoassay. Results: (1) The symptoms of morphine withdrawal were relieved significantly by ip melatonin(100 mg·kg－1); (2) cAMP contents in CSF (20.07 pmol·ml－1±s 4.62 pmol·ml－1) and plasma(76.40 pmol·ml－1±s 8.71 pmol·ml－1) of morphine dependent rats were lower than those of the normal rats,P<0.01, but cAMP contents in CSF(38.19 pmol.ml－1±s 6.62 pmol·ml－1) and plasma (96.65 pmol·ml－1±s 5.32 pmol·ml－1) of the morphine withdrawal rats were significantly higher than those of the morphine dependent rats,P<0.001;(3) cAMP contents in CSF (23.28 pmol·ml－1±s 4.10 pmol·ml－1) and plasma (61.72 pmol·ml－1±s 3.49 pmol·ml－1) of the morphine withdrawal rats were significantly reduced by ip MT, P<0.01 or P<0.001. Conclusion: Morphine withdrawal symptoms could be relieved by ip MT in morphine withdrawal rats, the mechanism of the effect of melatonin may be related to the decrease of endogenous cAMP level in brain and in plasma.
KEY WORDS melatonin; morphine dependence; morphine withdrawal; cAMP 

中国药物依赖性杂志

2002年 第11卷 第1期