摘要 目的: 研究三氟拉嗪对吗啡镇痛耐受性的影响。方法: 热板测痛法, 测定三氟拉嗪对小鼠热板(55℃)痛阈值(s)的影响;慢性吗啡处理使小鼠对吗啡的镇痛作用产生耐受性，观察低剂量三氟拉嗪对吗啡耐受小鼠最大镇痛效率的影响。结果：(1) 三氟拉嗪(2－20 mg·kg－1)呈剂量依赖性延长小鼠的热板(55℃)痛阈值(s)；(2)慢性吗啡处理使6 mg·kg－1吗啡最大镇痛效率降低42.2％ (P< 0.05), 9 mg·kg－1 吗啡最大镇痛效率降低9.8％ (P>0.05)；(3)合用低剂量三氟拉嗪(2 mg·kg－1)和吗啡(6 mg.kg－1)可以使吗啡耐受小鼠的最大镇痛效率提高47.9％ (P<0.01), 其最大镇痛效率与单独急性吗啡(6 mg·kg－1)处理相同。结论：三氟拉嗪对小鼠的吗啡镇痛耐受性存在翻转作用。 
    关键词 三氟拉嗪； 钙调蛋白； 吗啡； 耐受性

    三氟拉嗪（trifluoperazine hydrochloride,TFP）除了具有较强多巴胺－2（DA2）受体的拮抗作用外，还对钙调蛋白（calmodulin,CaM）具有特异性的抑制作用[1]。研究资料表明[2]，TFP作为CaM特异性抑制剂对吗啡依赖大、小鼠纳洛酮催促的戒断症状具有抑制作用。然而，有关TFP对吗啡镇痛耐受性的影响尚未见报道。因此，本文旨在初步研究TFP对小鼠吗啡镇痛耐受性的翻转作用。

1 材料和方法
1.1 动物和药物
    昆明种小鼠，购自军事医学科学院动物中心。♀，体重18－22 g，笼养，每笼6－12只，室温20－24℃，自然光照，食水不限。
    盐酸三氟拉嗪购自Sigma公司，批号：107H0643；盐酸吗啡（morphine hydrochloride, Mor）购自青海制药厂，批号：981101。
1.2 热板法测痛试验
    参照Maldonado等所报道的方法[3]，利用热板测痛仪进行热板法测痛试验。热板温度55℃，疼痛反应指标为舔后足或跳跃，截止时间(cut off time)为120 s，测定疼痛反应的潜伏期（痛阈）。最大镇痛效率（percentage of maximal possible effect, MPE％）计算公式：（试验组的痛阈值—对照组的痛阈值）/（截止时间—对照组的痛阈值）×100％。实验程序如下：急性皮下注射（sc）Mor或腹腔注射（ip）TFP 30 min后，进行热板试验，各组均以生理盐水（NS）为对照组。
1.3小鼠吗啡镇痛耐受性测定
    连续给小鼠sc Mor 15 mg·kg^－1 3 d,每天2次(8:00, 16:00), 对小鼠进行慢性Mor处理，建立小鼠Mor镇痛耐受模型。以NS为对照组, 注射容积为1 ml·g^－1。各组实验程序如下：NS组：小鼠sc NS 3 d,d4 上午8:00 , sc 最后一针NS。9 h后，ip NS, 10 min后再次sc NS，30 min后进行热板（55℃）测痛试验；急性Mor组： 小鼠sc NS 3 d, d4 上午8:00, sc最后一针NS。9 h后ip NS, 10 min后sc Mor 6 mg·kg^－1, 30 min后进行热板（55℃）测痛试验；慢性Mor组：小鼠sc Mor 3 d,d4 上午8:00, sc最后一针Mor 15 mg·kg^－1。9 h后ip NS, 10 min后sc Mor 6 mg·kg^－1, 30 min后进行热板（55℃）测痛试验；TFP组：小鼠sc Mor 3 d,d4上午8:00, sc 最后一针 Mor 15 mg·kg^－1。9 h后ip TFP 2 mg·kg^－1。10 min后sc Mor 6 mg·kg^－1, 30 min后进行热板（55℃）测痛试验。
1.4 统计学分析
    实验结果均以x ±s表示。采用SPSS统计软件进行方差分析(ANOVA)和组间t检验。

2 结果
2.1 三氟拉嗪对小鼠热板痛阈值的影响
    ip TFP 2 或10 或20 mg·kg^－1，30 min后，测定小鼠热板（55℃）痛阈值。图1结果显示：随着TFP的剂量增加，小鼠热板（55℃）痛阈值明显延长, ip 20 mg·kg^－1后与NS组比较P<0.05。说明TFP对热板（55℃）刺激具有一定的拮抗作用。虽然ip TFP 2 和10 mg·kg^－1小鼠热板（55℃）痛阈值存在延长的趋势，但是其差异无显著性。TFP 2，10，20 mg·kg^－1抗热板（55℃）最大镇痛效率分别为：5.4％, 11.7％, 36.4％。
2.2 慢性吗啡处理对小鼠吗啡镇痛耐受性的影响
    按照上述程序，连续3 d sc Mor对小鼠进行慢性Mor处理。d4 sc 最后一针Mor, 9 h后，sc Mor 3 或6 或9 mg·kg^－1, 30 min 后测定小鼠的热板（55℃）痛阈值(s)。并计算其最大镇痛效率。图2显示：与急性Mor组相比较，慢性Mor处理对于3 mg·kg^－1 Mor最大镇痛效率毫无影响。虽然慢性Mor处理可以使9 mg·kg^－1 Mor最大镇痛效率降低9.8％。但是，与急性Mor组相比较， 并无统计学意义。 然而， 慢性Mor处理则可以使6 mg·kg^－1 Mor最大镇痛效率降低33.4％，与急性Mor组相比较其差异具有显著性（P<0.05）。
2.3 三氟拉嗪对吗啡镇痛耐受性的翻转作用
    根据上述实验结果，选择Mor 6 mg·kg^－1为吗啡镇痛耐受性的敏感剂量，TFP 2 mg·kg^－1为抗热板（55℃）刺激的阈下剂量。图3结果表明：与NS组相比较，急性sc Mor 6 mg·kg^－1使小鼠热板（55℃）的痛阈值明显延长（P<0.001）, 最大镇痛效率达到62.2％；经过慢性Mor处理的小鼠，sc Mor 6 mg·kg^－1, 其热板（55℃）痛阈值比急性Mor组小鼠的痛阈值明显缩短（P<0.01）。慢性Mor组6 mg·kg^－1 Mor最大镇痛效率仅为20.0％。小鼠经过慢性Mor处理后， 在sc Mor 6 mg·kg^－1之前，ip TFP 2 mg·kg^－1, 其热板痛阈值与慢性Mor组相比较明显延长（P<0.01）, TFP组6 mg·kg^－1 Mor最大镇痛效率为67.9％。此结果表明慢性Mor处理可以使小鼠对Mor的镇痛药理活性产生耐受性，而TFP抗热板（55℃）刺激的阈下剂量（2 mg·kg－11）对小鼠Mor镇痛耐受性具有翻转作用。

3 讨论
    慢性Mor处理可产生机体对Mor的耐受性，主要表现为Mor镇痛效率降低， 呼吸抑制作用减轻[4]。本研究以Mor抗小鼠热板（55℃）伤害刺激的最大镇痛效率为观察指标，结果显示：慢性Mor处理后对低剂量 Mor (3 mg·kg^－1)和高剂量组(9 mg·kg^－1) 小鼠的镇痛耐受性无明显影响。在本热板（55℃）测痛实验中，sc Mor 6 mg·kg^－1为慢性Mor处理小鼠所致Mor镇痛耐受性较为敏感的剂量。
    实验结果表明TFP具有一定的镇痛作用。在热板（55℃）测痛试验中，TFP使小鼠痛阈值明显延长（图1）, 且呈剂量依赖性。 然而，与Mor相比较，TFP的镇痛作用较弱。ip TFP 20 mg·kg^－1的最大镇痛效率仅有36.4％，而sc Mor 9 mg·kg^－1的最大镇痛效率则达到100％，两者相比，差异具有非常显著性意义（P<0.001）。研究资料表明[5]，中枢神经系统的μ受体和DA2受体均不参与TFP的镇痛作用，TFP可能通过抑制受体后CaM的活性发挥其镇痛的药理学作用。
    虽然TFP具有较弱的抗热板（55℃）刺激的药理活性，但是，ip TFP 2 mg·kg^－1抗热板（55℃）最大的镇痛效率仅为5.4％，与NS组相比较，其差异并无统计学意义。图3的实验结果表明，经过慢性Mor处理的小鼠，其sc Mor 6 mg·kg^－1最大镇痛效率降低了42.2％，形成了镇痛耐受性。 同时，给予6 mg·kg^－1 Mor和2 mg·kg－1 TFP则可以使慢性Mor处理过的小鼠，其最大镇痛效率恢复到67.9％，提高47.9％。说明ip 2 mg·kg^－1 TFP对小鼠Mor镇痛耐受性具有明显的翻转作用。正如前所述，TFP具有拮抗DA2受体和抑制CaM双重药理活性。虽然有资料表明CaM参与阿片受体（μ－受体）的跨膜信号转导，对于Mor的镇痛，耐受性以及依赖性的形成发挥了极其重要的作用[6－8]。但是，有关TFP翻转Mor镇痛耐受性的作用机理有待进一步研究。

4 参考文献
1 刘景生,主编.细胞信息与调控.北京: 北京医科大学/中国协和医科大学联合出版社, 1998.197.
2 梁建辉, 叶向锋， 孙红蕾, 等. 三氟拉嗪抑制吗啡依赖大、小鼠纳洛酮催促的戒断症状. 中国药理学通报, 2001， 17：
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3 Maldonado R, Blendy JA, Tzavara E, et al. Reduction of morphine abstinence in mice with a mutation in the gene en_
coding CREB. Science, 1996, 237: 657－659.
4 Erdtmann－Vourliotis M, Mayer P, Linke R, et al. Long－lasting sensitization towards morphine in motoric and limbic 
areas as determined by c－fos expression in rat brain.Brain Res Mol Brain Res, 1999, 72(1): 1－16.
5 梁建辉, 孙红蕾， 叶向锋, 等. 三氟拉嗪的抗伤害作用及其作用机理. 中国药理学与毒理学杂志, 2001， 15： 256－261.
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nociceptive behavior. Eur J Pharmacol, 1997, 335(1): 9－14.
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8 Wang D , Sadee W, Quillan JM. Calmodulin binding to G－protein－coupling domain of opioid receptors. J Biol Chem, 
1999, 274(31): 22081－22088.

REVERSAL OF TRIFLUOPERAZINE ON MORPHINE ANALGESIC TOLERANCE IN MICE

LIANG Jianhui, SUN Honglei, PAN Lishan, CUI Yangying, LIU Ruike
(National Institute on Drug Dependence, Peking University, Beijing， 100083)

ABSTRACT Objective: To explore the effect of trifluoperazine on tolerance of morphine analgesia in mice. Method: With hot－plate test, the effect of trifluoperazine on pain threshold (s) in mice was investigated. Chronic treatment of morphine in mice yielded the tolerance to morphine analgesia and then the effect of low dose trifluoperazine on percentage of maximal possible effect(MPE％) in morphine－tolerated mice was observed. Result:(1) Trifluoperazine (2－20 mg·kg^－1) dose－dependently increased pain threshold (s) in hot plate (55℃) test; (2) Chronic administration of morphine reduced 42.2％ MPE in morphine 6 mg·kg^－1 group (P<0.05);(3) Co－administration of trifluoperazine (2 mg·kg^－1) and morphine (6 mg·kg^－1) rose 47.9％ MPE in morphine－tolerated mice, which was within the same range as the acute morphine 6 mg·kg^－1 group. Conclusion: Trifluoperazine may reverse the tolerance of morphine analgesia in mice.
KEY WORDS trifluoperazine; calmodulin; morphine; tolerance
收稿日期：2001－04－28; 修回日期：2001－06－18

中国药物依赖性杂志

2001年 第10卷 第4期