摘 要 目的： 观察盐酸地尔硫卓对小鼠吗啡戒断反应及血清单胺类递质的影响。方法： 皮下注射(sc)定量吗啡,建立小鼠吗啡依赖模型;腹腔注射(ip)纳洛酮催瘾。根据小鼠戒断反应中出现跳跃反应的潜伏期和跳跃次数评定戒断反应的强度。用荧光分光光度计检测血中单胺类递质含量。结果： 3种不同剂量(25、50、100 mg·kg－1)的盐酸地尔硫卓对小鼠吗啡戒断反应有明显抑制作用，并呈量效关系。结论： 100 mg·kg－1的盐酸地尔硫卓可抑制小鼠吗啡戒断反应，并抑制戒断反应引起的血中单胺类递质的升高。
    关键词 盐酸地尔硫卓； 吗啡； 去甲肾上腺素； 多巴胺

    阿片类药物成瘾者一旦停药可产生难以忍受的戒断症状和心理依赖， 其机理复杂， 治疗困难。复发率高[1]。钙拮抗剂对高级神经系统功能有独特作用，目前已有用于治疗药物依赖和抑郁失眠等症的报道[2]。本试验旨在观察钙拮抗剂盐酸地尔硫卓（diltiazem hydrochloride）对小鼠吗啡戒断反应及血清单胺类递质的影响。

1 材料与方法
1.1 实验动物 
    选用体重为20－25 g的♂昆明种小鼠，由北京大学医学部动物部提供。
1.2 吗啡依赖性动物模型 
    动物连续sc定量吗啡（70 mg·kg－1，每日两次）， d6停止注射，并于停药当天上午9∶00 ip阿片受体拮抗剂纳洛酮5 mg·kg－1 ， 记录小鼠出现跳跃反应的潜伏期和30 min内的跳跃次数， 小鼠出现跳跃作为戒断反应的指标。
1.3 血液处理 
    将正常小鼠及吗啡戒断小鼠断头取血，血中加1％肝素钠溶液抗凝，置于冰浴保存待测。
1.4 血中单胺类递质浓度检测 
    由小鼠的断头取血，并获得血浆。取1 ml血浆加入0.6 mol·L－1的三氯醋酸1 ml，离心(3000 r·min－1) 5 min, 取上清液加蒸馏水稀释10倍。取1 ml血清稀释液加正丁醇2 ml和0.05 mol·L－1的硼酸缓冲液0.5 ml，震荡5 min， 离心(4000 r·min－1)10 min，取上层有机相加正庚烷3 ml和0.1 mol·L－1 的盐酸， 震荡5 min，离心(4000 r· min－1)10 min，吸出下层水相，加入0.01 mol·L－1 EDTA/2 mol·L－1 乙酸钠溶液2.4 ml和0.5 mol·L－1 I2 0.1 ml, 摇匀后静置2 min，再加入0.7 mol·L－1的碱性硫酸钠0.2 ml， 静置4 min后，加入5 mol·L－1的乙酸0.2 ml, 摇匀后置于80 ℃水浴15 min， 然后迅速降温，在酶免疫荧光分光光度计上测定去甲肾上腺素(NE)。在此基础上加7.25 mol·L－1磷酸0.1 ml，沸水浴15 min， 迅速降温后， 测定多巴胺（DA）。
1.5 药品及试剂 
    盐酸地尔硫卓由田边制药株式会社出品，批号：（95）J－45(2)号；盐酸吗啡由青海制药厂出品，批号：981102；去甲肾上腺素（NE）由上海禾丰制药有限公司出品，批号：990501；多巴胺,由上海禾丰制药有限公司出品，批号：9903011。
1.6 研究方法 
1.6.1盐酸地尔硫卓对小鼠吗啡戒断反应的影响 64 只小鼠分4组,每组16只，分别在纳洛酮催瘾前30 min ip生理盐水及25、50、100 mg·kg－1三种剂量盐酸地尔硫卓。
1.6.2 盐酸地尔硫卓对吗啡依赖小鼠血中单胺类递质的影响 48只小鼠分3组，每组16只，第1组为正常对照组；第2组为吗啡戒断组；第3组为吗啡戒断前ip盐酸地尔硫卓100 mg·kg－1组。
1.7 数据处理 
    各组数据以x ± s 表示，以t检验比较两组的差异显著性。

2 结果
2.1 盐酸地尔硫卓对小鼠吗啡戒断反应的影响 
    实验表明，3种不同剂量的盐酸地尔硫卓可使吗啡依赖小鼠跳跃潜伏期不同程度延长，使小鼠跳跃次数明显减少，体重丢失也有改善，在此剂量范围内盐酸地尔硫卓对小鼠吗啡戒断反应的抑制呈量效关系，见表1。
2.2 盐酸地尔硫卓对吗啡戒断小鼠血中NE及DA含量的影响 
    实验结果发现纳洛酮诱发戒断反应后血浆NE及DA含量明显高于正常组。纳洛酮催瘾前30 min给予盐酸地尔硫卓，可使吗啡戒断小鼠血中NE及DA含量明显回降，与吗啡戒断组相比均有非常显著性差异，见表2。
3 讨论
    本实验观察到盐酸地尔硫卓对吗啡戒断小鼠的戒断反应有明显抑制作用，并降低吗啡戒断小鼠血浆单胺类递质。 吗啡戒断症状是由中枢和外周神经系统中的神经元兴奋性反应引起的[3，4]。吗啡成瘾者蓝斑核（locuscoeruleus，LC）肾上腺素能神经元活性增高。吗啡戒断与去甲肾上腺素能作用紧密相关。戒断期间许多神经递质( NE、 Ach )释放增多。戒断综合征尤其与NE能神经元的高活性直接相关,Ca2＋流入量增加引起神经递质的释放，而钙拮抗剂阻断电压依赖性钙通道,减少了钙离子流入神经细胞,使NE释放减少,从而抑制戒断反应[5]。本实验用钙拮抗剂盐酸地尔硫卓不仅使小鼠戒断反应出现的潜伏期明显延长,跳跃次数有明显减少,并在该剂量范围内呈现很好量效关系,另外对戒断反应引起的体重丢失明显改善，表明钙拮抗剂通过中枢和外周两种机制抑制吗啡戒断反应。
    蓝斑核是最主要的阿片类身体依赖性调控部位,是脑内最大的去甲肾上腺素能神经核。对吗啡类药物依赖的神经生物学研究[6,7]指出：吗啡依赖与神经系统中类阿片肽及单胺系统密切相关,吗啡与蓝斑核μ受体结合,关闭钙离子通道,开启钾通道,增加K＋通透性,使蓝斑核发生抑制。吗啡戒断时,受抑制的蓝斑核突然活跃,放电增强,伴随去甲肾上腺素释放增加，导致不同的戒断反应产生。动物实验证明多巴胺参与人与动物的阿片戒断[8]。另外戒断反应时,植物性神经系统活动失调。我们以往工作表明吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断反应时交感系统活力增强, 肾上腺髓质分泌单胺类递质增加,心率加快,血压升高[9]，并伴有躯体反应,这与本实验中观察结果一致。用盐酸地尔硫卓后可能阻断NE神经元突触前膜Ca2＋通道的开放，使钙离子向突触前膜内流减少，导致NE神经元的递质释放减少，因此在本实验中观察到戒断小鼠血浆中NE和DA大幅度下降,抑制了吗啡戒断反应。本实验中是否也会引起中枢内单胺类递质改变,尚需进一步证实。

4 参考文献
1姜佐宁.阿片类药物依赖脱敏治疗的若干进展.中国药物依赖性通报(试刊),1990, 5: 6－7.
2 Pucilowski O.Psychopharmacological properties of calcium channel inhibitors.Psychopharmacology, 1992, 109: 12－29.
3 Pellegrini－Giampietro DE,Bacciottini L,Carla V,et al. Morphine withdrawal in cortical slices： suppression by Ca2＋ 
channel inhibitors－induced (3H)noradrenaline release.Br J Pharmacol, 1988, 93: 535－540.
4 Alfaro MJ, Colado MI,Lopez F,et al.Effect of clonidine nimodipine and diltiazem on the in vitro opioid withdrawal 
response the guinea－pig ileum.Br J Pharmacol, 1990, 101: 958－960.
5 Baeyens JM, Esposito E, Ossowska G,et al. Effects of peripheral and central administration of calcium channel blocker 
in the naloxone precipitated abstinence syndrome in morphine dependent rats. Eur J Pharmacol, 1987, 137: 9－13.
6 Spanagel R, Herz A, Shippenberg TS. Opposing tonically active endogenous opioid systems modulate the mesolimbic 
dopaminergic pathway. Proc Natl Acad Sci USA, 1992, 89: 2046－2050.
7 Di chiara G, North RA. Neurobiology of opiate abuse. Trends Pharmacol Sci, 1992, 13: 185－193.
8 Clay GA, Broupham LR. Haloperidol binding to an opiate receptor site. Biochem Pharmacol, 1975, 24:1363－1367.
9 朱显武， 王宏伟, 何 魏, 等.吗啡依赖大鼠戒断后心血管活动的改变及机理.中国药物依赖性杂志, 1998 , 7∶77－80.

INHIBITORY EFFECT OF DILTIAZEM HYDROCHLORIDE ON MORPHINE WITHDRAWAL SYNDROMES AND SERUM MONOAMINES IN MORPHINE DEPENDENT MICE

GAO Jianfeng1, ZHAO Haiyan2, WANG Shixiong3, Qiu Xuecai4

1(Department of Physiology,Henan Chinese Medical College, Zhengzhou, 450003)
2(Beijing Medical School,Beijing, 101300)
3(Hainan Medical College, Haikou, 570000)
4(Department of Physiology, Peking University Health Science Center,Beijing, 100083)

ABSTRACT Objective: To observe the inhibitory effect of diltiazem hydrochloride on morphine dependent mice. Method: A physical dependent model in mice was established by subcutaneous injection of morphine. The intensity of withdrawal syndromes was evaluated according to the jumping latency and jumping times. The concentration of serum monoamines was detected with spectrofluorophotometer. Result: The physical withdrawal syndromes in morphine dependent mice were inhibited partly by three different doses (25、50、100 mg·kg－1) of diltiazem hydrochloride and showed a significant dose－dependent manner. The increased concentration of serum norepinephrine and dopamine in morphine－dependent mice could be reduced by large dose (100 mg·kg－1) of diltiazem hydrochloride. Conclusion: The jumping withdrawal syndromes and serum monoamines in morphine－dependent mice could be inhibited partly by diltiazem hydrochloride .
KEY WORDS diltiazem hydrochloride; morphine; norepinephrine; dopamine
收稿日期：2000－06－22; 修回日期：2000－09－18

中国药物依赖性杂志

2001年 第10卷 第2期