摘要 目的： 探讨5－HT2A受体基因多态性与海洛因依赖易感性的关系。方法：用聚合酶链式反应（PCR）技术结合限制性片段长度多态性（RFLP）分析技术，检测了99名海洛因依赖者和80名正常对照者5－HT2A受体基因1438A/G多态性的基因型和等位基因频率。结果： 海洛因依赖者5－HT2A受体基因1438A/G多态性基因型A1/A2的频率较对照组高。结论： 5－HT2A受体基因1438A/G多态性可能与海洛因依赖的易感性有关。
    关键词 海洛因依赖； 多态性； 5－HT2A受体基因

    药物依赖是一组复杂的疾病，它是个体素质因素与环境因素相互作用所致。对药物依赖的易感性存在种族和个体的差异，家系调查、双生子研究、寄养子研究、部分生化研究及现代分子遗传学研究都支持遗传因素在药物依赖中起一定的作用[1－2]。随着近代分子生物学向各个学科的渗透，对药物依赖的分子遗传学研究也日益受到人们的关注。5－羟色胺（5－HT）是一种重要的神经递质，在中枢分布十分广泛，参与了各种精神活动的调节，许多研究证实5－HT与物质依赖有关[3－4]，如发现5－HT重吸收抑制剂可减少酒的使用量，5－HT部分拮抗剂可减轻对可卡因的渴求，5－HT1B受体缺乏的小鼠易形成海洛因依赖，酒精强化作用及对酒精的偏好与5－HT受体的密度有关。目前尚未见5－HT受体基因是否与海洛因依赖关系方面的研究报道，本研究选择5－HT2A受体基因1438A/G多态性位点为研究靶点，探讨其与海洛因依赖的关系。

1 材料与方法
1.1 研究对象
    海洛因依赖组来自于湖南省新开铺劳教所的99例吸毒劳教人员，对照组80例来自湖南医科大学的自愿者及湖南医科大学精研所部分医护人员。入组标准：年龄>15 a，汉族，排除严重的躯体疾病、遗传疾病及重性精神疾病者，海洛因依赖组均符合DSM－Ⅲ－R海洛因依赖诊断标准。
1.2 实验方法
1.2.1 提取人类gDNA 采抗凝静脉血5 ml，采用常规酚氯仿法提取外周血基因组DNA（gDNA）。
1.2.2 5－HT2A受体基因1438A/G多态性分析 
    人类5－HT2A受体基因启动子区1438位有A或G碱基变化，从而形成该基因启动子区1438A/G多态性，如果1438位为碱基G，则形成一个MspI 酶切位点[5]，本研究采用Warren等设计的RFLP 方法[6]，选择PCR扩增引物引导合成包括5－HT2A受体基因1438A/G多态性位点长468bp的DNA片段，如果5－HT2A受体基因1438位为碱基A，PCR产物不能被MspI酶切，仍为468bp，如果1438位为碱基G，PCR产物被MspI酶切成244bp和224bp两个片段。如两条等位基因1438位均为碱基A时，判断该个体的基因型为A1/A1，如两条等位基因1438位均为碱基G时，判断该个体的基因型为A2/A2，如两条等位基因分别为A1和A2时，判断该个体的基因型为A1/A2（见图1）。
PCR扩增引物[5]为5'－AAG CTG CAA GGT AGC AAC AGC －3'和5'－AAC CAA CTT ATT TCC TAC CAC－3'。PCR反应体系：100 ng模板DNA, dNTP各200 μmol·L－1，1×Tag Buffer（含MgCl2 1.5mmol·L－1），上、下游引物各0.5 μmol·L－1,Tag DNA聚合酶1U, 20 μl反应体积。PCR反应条件： 94 ℃预变性5 min, 94 ℃变性40 s，59 ℃复性30 s，72 ℃延伸40 s,共35个循环,72 ℃延伸10 min。取10 μl PCR 产物,加MspI 10U,1×MspI buffer, 15 μl反应体积，37 ℃酶切反应5 h。酶切产物在含有EB的2.5％琼脂糖凝胶中电泳（75V，1h），紫外灯下观察结果, 照像。 
1.3 统计分析
    所有资料的统计均由SPSS 8.0 for Windows在586计算机上完成。根据Hardy－weinberg定律，比较各基因型的实得数与预期数，了解各基因型在人群中遗传平衡符合程度，用χ2检验；比较两组间各基因型及等位基因的频率的差异，用χ2 检验。

2 实验结果
2.1 一般资料
    共分析了海洛因依赖者99例，其中男性占61.6％（61例），女性38.4％（38例），均为汉族，平均年龄28.3 a±s 6.7 a。正常对照者80例，其中男性占60％（48例），女性40％（32例），均为汉族，平均年龄23.5 a±s 6.5 a。两组在性别、年龄组成上无显著性差异（P>0.05）。
2.2 两组人群Hardy－weinberg遗传平衡检验
    为了解两组研究人群是否为遗传平衡群体，用χ2检验法分别对海洛因依赖组和正常对照组进行了Hardy－weinberg遗传平衡检验，结果显示，两组人群均符合Hardy－weinberg遗传平衡（df=1， P>0.05），说明这两个研究人群来自大的群体，个体间是随机婚配，不存在明显的自然选择、迁移等因素对遗传平衡的影响。
2.3 5－HT2A受体基因启动子区1438A/G多态性位点RFLP分析
    5－HT2A受体基因启动子区1438A /G多态性位点RFLP分析电泳结果见图1，海洛因依赖组和正常对照组 5－HT2A 受体基因启动子区 1438A /G多态性的基因型及等位基因频率见表1。
    表1结果显示，海洛因依赖者的基因型A1/A1明显少于对照组（P<0.05），基因型A1/A2的频率明显高于对照组(P<0.05)，提示基因型A1/A2与海洛因易感性有关，A1、A2等位基因在两组间分布无显著性差异。

3 讨论
    药物依赖虽然与社会文化及心理因素密切相关，但依赖性物质作为一种特殊的药物，其对机体的作用过程也受遗传的影响。寻找精神分裂症、情感性疾病、药物依赖等疾病的致病基因或易感基因是精神疾病分子遗传学研究的热点之一，对于遗传机制复杂的精神疾病，研究其“侯选基因”是一种有效的方法。有关药物依赖机制的假说认为药物依赖与中脑－前脑－边缘系统的阿片肽系统、多巴胺系统、5－HT系统等有关[7]，5－HT是一种重要的神经递质，参与了各种精神活动的调节，大量研究[3－4]证实5－HT与药物依赖有关，5－HT受体基因敲除的小鼠易形成自我注射可卡因的行为。本研究选择了5－HT2A受体基因1438A/G这一多态性位点，采用关联分析的方法，分析了海洛因依赖与5－HT2A受体基因的关系，关联分析是分析多因素影响疾病遗传效应的一种有效方法，它能发现对疾病作用微小的基因。本研究结果显示，5－HT2A受体基因的基因型A1/A2的频率明显高于正常对照者，说明其与海洛因依赖相关联，5－HT2A基因可能是海洛因依赖的易感基因或存在连锁不平衡，至于其对于海洛因依赖的作用机制，有待于进一步研究，依赖性药物进入中枢神经系统，引起神经递质的改变，进而影响情绪、记忆、选择性注意、继发性强化等而中介成瘾过程，5－HT2A受体的不同基因型可能影响依赖性物质对神经递质的反应性，从而影响成瘾的易感性。迄今为止，本研究是首次有关海洛因依赖与5－HT2A基因关系的报道，因此，本研究结果是初步的，需要在更大的样本及不同人群中进行进一步的研究，才能得出肯定一致的结论。 

4 参考文献
1 Myers RD, Robinson DE, West MW, et al. Genetics of alcoholism: rapid development of a new high－ ethanol－prefer_
ring (HEP) strain of female and male rats. Alcohol, 1998, 16(4): 343－357.
2 Tsuang MT, Lyons MJ, Eisen SA, et al. Genetic influences on DSM－Ⅲ－R drug abuse and dependence: a study of 
3372 twin pairs. Am J Med Genet, 1996, 67: 473－477.
3 Devoto P, Colombo G, Stefanini E, et al. Serotonin is reduced in the frontal cortex of Sardinian ethanol－preferring 
rats. Alcohol Alcohol, 1998, 33(3): 226－229.
4 Buydens－Branchey L, Branchey M, Fergeson P, et al. Craving for cocaine in addicted users. Role of serotonergic 
mechanisms. Am J Addict, 1997, 6(1): 65－73.
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Mol Barin Res, 1992, 14: 20－26.
6 Warren JT, Peacock ML, Rodriguez LC, et al. An MspI polymorphism in the human serotonin receptor gene (HTR2): 
detected by DGE and RFLP analysis. Hum Mol Genet, 1993, 2: 338.
7 Koob GF. Drugs of abuse: anatomy, pharmacology and function of reward pathways. Trends Pharmacol Sci, 1992, 13: 
177－184.

HEROIN DEPENDENCE VULNERABILITY AND THE 1438A/G POLYMORPHISM 
OF 5－HT2A RECEPTOR GENE

ZHAO Min1, YANG Desen1, HAO Wei1, ZHANG Xianghui1, ZHANG Yalin1, 
LI Lingjiang1, LIU Teqiao1
1（Mental Health Institute, Hunan Medical University, Changsha, 410011）

ABSTRACT Objective：To explore the association between the 1438A /G polymorphism of human 5－HT2A receptor gene and heroin addicts. Methood: Genotype and allele frequencies of 1438A/G polymorphism of 5－HT2A receptor gene in 99 heroin addicts and 80 normal controls were examined by PCR and RLFP technique. Result: The genotype A1 /A2 frequency of 5－HT2A receptor gene in heroin addicts is significantly higher than that in control group. Conclusion: The 1438A /G polymorphism of 5－HT2A receptor gene is associated with heroin abuse. 
KEY WORDS heroin addict; polymorphism; 5－HT2A receptor gene
修回日期：2000－07－19

中国药物依赖性杂志

2000年 第9卷 第4期