摘要   应用脑内透析技术结合高效液相色谱电化学检测研究了多巴胺D1和D2受体拮抗剂对乙醇引起大鼠纹状体抗坏血酸(AA)释放的影响。乙醇(3.0 g·kg^－1, ip)显著增加纹状体抗坏血酸释放，高于基础水平的200％左右。多巴胺D2受体拮抗剂舒必利(200 mg·kg^－1, ip)能显著拮抗乙醇引起的纹状体AA释放，而D1受体拮抗剂SCH 23390(0.5, 1.0 mg·kg^－1, sc)则能协同增加其释放。非选择性多巴胺受体拮抗剂氯丙嗪、氟哌啶醇、氯波必利对纹状体AA基础释放及乙醇引起纹状体AA释放均无显著影响。联合使用舒必利(100 mg·kg^－1, ip)和SCH 23390(0.5 mg·kg^－1, sc)对乙醇引起的纹状体AA的释放也无影响。此结果提示，多巴胺D1受体和D2受体的阻断对乙醇引起的大鼠纹状体AA释放具有相反的调节作用。
    关键词   舒必利； SCH 23390； 多巴胺受体拮抗剂； 抗坏血酸； 乙醇； 纹状体； 微透析法

      乙醇(ethanol)作为最常见滥用药物之一，象其他滥用药物一样，对人和动物中枢神经系统的功能产生多种多样的影响。急性给予乙醇能激活伏隔核、黑质、脑干腹侧被盖区多巴胺能神经元，促进大鼠纹状体多巴胺的合成、更新和释放等[1,2]。乙醇也能增加大鼠纹状体和伏隔核中抗坏血酸的释放[3,4]。
      抗坏血酸(ascorbic acid, ascorbate, AA)广泛存在于哺乳动物体内，除肾上腺外，抗坏血酸在脑内含量最高。抗坏血酸在脑内呈不均匀分布，如在大脑皮层、海马、下丘脑、纹状体等脑区含量较高，约200－300 mM。许多药物如苯丙胺、烟碱、乙醇[3－6]等均能增加大鼠纹状体中抗坏血酸的释放；而地西泮则减少其释放[7]。说明药物对纹状体抗坏血酸水平的影响具有一定的特异性，提示研究纹状体抗坏血酸代谢具有重要的生理和药理意义。
      Pierce 提出[8]，引起纹状体抗坏血酸释放是间接多巴胺受体激动剂的一个共同特性。许多滥用药物引起纹状体多巴胺释放而显示了对多巴胺能神经系统的兴奋作用。由此提示我们，滥用药物如乙醇引起的纹状体抗坏血酸释放可能与多巴胺能神经系统有一定联系。因此本文利用脑微透析技术结合高效液相电化学检测系统研究了多巴胺受体拮抗剂对乙醇引起的大鼠脑内纹状体抗坏血酸释放的影响。

1  材料与方法
1.1 动物
      Wistar种大鼠，♀，体重250－300 g，沈阳药科大学动物实验室提供。
1.2 药品
      舒必利(L－sulpiride, Ravizza, Milan, Italy) 使用前溶解于0.12 mmol·L^－1乙酸生理盐水中；SCH 23390(Schering Corporation,Bloomfield, NJ) 溶解于温蒸馏水中；盐酸氟哌啶醇(haloperidol HCl)注射液，上海海普药厂生产；盐酸氯丙嗪(chlorpromazine HCl)，购于丹东制药厂；氯波比利(clebopride)，纯度：99.1％，由沈阳华泰药物研究所提供，均溶解于蒸馏水中。以上药物剂量均以它们的盐计算。
1.3 手术方法
      取大鼠，ip 350 mg·kg^－1水合氯醛，待大鼠麻醉后， 将其固定于大鼠脑立体定位仪上。 参照Wu 等的方法[9－11]，将事先做好的透析管植入脑内。术后大鼠恢复18－24  h进行灌流。
1.4 透析灌流
      灌流液为事先配好并经G6垂熔漏斗过滤的Ringer's液(pH=5.9)。以5 μl·min^－1流速恒速灌流，测定前先灌流30 min，弃去灌流液，以后每10 min收集一个样品，待给药前3个样品中抗坏血酸含量基本稳定后(含量相差不超过10％)，进行给药。给药方式均先给多巴胺受体拮抗剂，5 min以后ip 3 mg·kg^－1乙醇，观察给乙醇后2 h内纹状体抗坏血酸释放的变化。实验结束后，将动物断头，检查透析管埋植部位是否正确，位置不正确者，数据弃之。
1.5 抗坏血酸含量测定
      取透析液样品20 μl，立即注入高效液相－电化学检测系统，测定抗坏血酸含量。LC－10AD 型恒流泵：Shimedzu Corporation, Chromatographic Instruments Division, Kyoto, Japan;色谱柱：ODS－C18，5 μm，中国科学院化学物理研究所；电化学检测器(ECD 641 amperometric detector, Metrohm, Swiss.) 工作电压：＋0.60 V；检测灵敏度：5 nA；流动相组成：155.6 mmol·L^－1氯化钠、1.5 mmol·L^－1四丁基溴化铵、乙二胺四乙酸二钠(EDTANa2) 0.54 mmol·L^－1水溶液，G6垂熔漏斗过滤后使用。
1.6 统计学处理
      将给药前3个样品的测定值的平均值作为基础值，给药后每10 min的变化以基础值的百分数来表示。绘制曲线图。而后计算每组每只动物的曲线下面积，用两因素方差分析(ANOVA)判断总体显著性与交互作用，进一步用LSD－t检验分析组间各时间点的显著性差异。

2  结果
      未经体外回收率校正，每10 min测得正常大鼠纹状体细胞外液抗坏血酸含量为34.18 ng±s 2.73 ng(n=41)，并且在3 h内基本稳定。乙醇3 g·kg^－1, ip 显著增加大鼠脑内纹状体抗坏血酸释放，其释放量在给药后30－50 min左右达到峰值，峰值在基础值的200％以上。
2.1 舒必利对乙醇引起大鼠纹状体抗坏血酸释放的影响
      舒必利100 mg·kg^－1, ip明显降低纹状体抗坏血酸的基础释放(F1,12=7.67, P<0.05)，对乙醇引起的抗坏血酸释放有一定的降低作用(图1 A)。而舒必利200 mg·kg^－1能显著抑制乙醇引起的抗坏血酸的释放(F1,12=33.71,P<0.01)，但不影响基础的抗坏血酸水平(图1 B) 。
2.2 SCH 23390对乙醇引起大鼠纹状体抗坏血酸释放的影响
      SCH 23390 0.5 mg·kg^－1, sc明显增加纹状体抗坏血酸的基础释放(F1,12=23.27, P<0.01, 图2 A)，而1.0 mg·kg^－1对其的影响不明显。两个剂量组的SCH 23390均能促进乙醇引起的纹状体抗坏血酸释放的增加(0.5 mg·kg^－1组：F1,12=5.83, P<0.05；1.0 mg·kg^－1组：F1,12=4.25, P<0.05，图2 A, 2 B)。
2.3 舒必利和SCH 23390联合给药对乙醇引起大鼠纹状体抗坏血酸释放的影响
      舒必利 100 mg·kg^－1 (ip) 和SCH 23390 0.5 mg·kg^－1 (sc) 联合给药，对纹状体抗坏血酸的基础释放及乙醇引起的纹状体抗坏血酸释放均无显著影响(图3)。
2.4 氯丙嗪、氟哌啶醇、氯波比利对乙醇引起大鼠纹状体抗坏血酸释放的影响
      氯丙嗪(5 mg·kg^－1, sc)、 氟哌啶醇(1 mg·kg^－1, sc)、氯波比利(2 mg·kg^－1, sc)3种非选择多巴胺受体拮抗剂对纹状体抗坏血酸的基础释放乙醇引起的纹状体抗坏血酸释放均无显著影响(图4)。

3  讨论
      一次性给予乙醇能显著增加大鼠纹状体和伏隔核抗坏血酸释放[4]，但乙醇这种作用的机理尚不十分清楚。本研究表明，多巴胺D2受体拮抗剂舒必利(200 mg·kg^－1)显著抑制乙醇引起的抗坏血酸的释放，而D1受体拮抗剂SCH 23390(0.5,1.0 mg·kg^－1)则明显促进乙醇引起的释放。结果提示，多巴胺能神经系统参与乙醇引起的抗坏血酸释放；而且多巴胺D1和D2受体的分别阻断在乙醇引起大鼠纹状体抗坏血酸释放中起着相反的调节作用。
      多巴胺D1和D2受体亚型之间的相互作用很复杂，在不同条件下可表现为相互协同作用或相互拮抗作用。为证明D1、D2受体拮抗剂在本实验中观察到的相反作用，我们将多巴胺D1受体拮抗剂SCH 23390和多巴胺D2受体拮抗剂舒必利联合给药，发现它们各自应用时对大鼠纹状体抗坏血酸的基础释放和乙醇引起的抗坏血酸释放的作用消失。非选择性多巴胺受体拮抗剂氯丙嗪、氟哌啶醇、氯波比利在能够影响黑质纹状体多巴胺能神经系统功能的剂量下对乙醇引起的纹状体抗坏血酸的释放均无显著影响。上述结果说明，多巴胺D1、D2受体同时阻断不能影响乙醇引起的纹状体抗坏血酸释放，进一步证明了多巴胺D1、D2受体阻断在乙醇这种作用中的相反调节作用。
       在本实验中观察到，分别给予较高剂量的SCH 23390和舒必利对大鼠纹状体抗坏血酸的基础释放均无显著影响，此机理还不十分清楚。但已有报道指出，SCH 23390除具有多巴胺D1受体阻断活性外，对5－HT2受体也有一定的阻断活性，其阻断活性比D1受体阻断活性弱20倍[10]。而舒必利对D2和5－HT2受体均表现为阻断特性[11]。5－HT2受体拮抗剂阻断D2受体拮抗剂的许多作用已有报道[12]。但5－HT2受体是否参与高剂量SCH 23390和舒必利的作用还不清楚。但本研究显示，选择性5－HT2受体拮抗剂利坦舍林(ritanserin)部分抑制乙醇引起的大鼠纹状体抗坏血酸的释放(未报道)。近年来的研究工作也表明，乙醇引起的大鼠纹状体抗坏血酸的释放可被非竞争性NMDA受体拮抗剂MK－801、促5－HT释放、重摄取抑制剂芬氟拉明(fenfluramine)、5－HT1A受体激动剂[13－15]等所减少。因此提示调节纹状体抗坏血酸释放的机制可能很复杂。舒必利和SCH 23390在低剂量和高剂量时作用差异有待进一步研究。
      综上所述，乙醇引起大鼠纹状体抗坏血酸的释放能被舒必利所抑制，而被SCH 23390所促进，提示多巴胺D1和D2受体阻断对乙醇引起的大鼠纹状体抗坏血酸的释放起着相反的调节作用。D1和D2受体的同时阻断,此作用消失。

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EFFECT OF D1 AND D2 DOPAMINE RECEPTOR ANTAGONISTS ON ETHANOL－INDUCED ASCORBIC ACID RELEASE IN RAT STRIATUM

Liu Wen1, Wu Chunfu1, Liu Jing1, Silvana Consolo2

1(Department of Pharmacology of Chinese Materia Medica,Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang,110015)
2(Laboratory of Cholinergic System, Istituto di Ricerche Farmacologiche Mario Negri, Via Eritrea 62,Milan, Italy)

ABSTRACT  The effects of dopamine receptor antagonists on ethanol－induced striatal ascorbic acid (AA) release in rats were studied by using microdialysis coupled to high performance liquid chromatography with electrochemical detection. Ethanol(3.0 g ·kg^－1, ip) stimulated significantly striatal AA release by more than 200％ above the baseline. L－sulpiride(200 mg·kg^－1, ip), a D2 receptor antagonist, could antagonize ethanol－induced AA release, but SCH 23390(0.5, 1.0 mg·kg^－1, sc), a D1 receptor antagonist, increased ethanol－induced AA release synergistically. However, other nonselective  receptor antagonists(haloperidol 1 mg·kg^－1,sc, clebopride 2 mg·kg^－1,sc, chlorpromazine 5 mg·kg^－1,sc) showed no effects on either basal or ethanol－induced AA release. Moreover, the increasing effect of ethanol on striatal AA release could not be affected by the use of L－sulpiride (100 mg·kg^－1, ip) and SCH 23390(0.5 mg·kg^－1, sc) together. The results suggest that D1 and D2 receptor be oppositely involved in the regulation of ethanol－induced striatal AA release in rats.
KEY WORDS  dopaminergic receptor blocker; L－sulpiride; SCH 23390;ascorbic acid; ethanol; striatum; microdialysis

修回日期：1998－11－23

中国药物依赖性杂志

1999年 第8卷 第3期