1 引言

　　近年来，毛发分析已在诸多领域得到较广泛的应用，因为其具有尿液、血液等生物体液分析无法比拟的优越性：长时间的检测窗口;可靠的分析结果和全面的毒品滥用信息;检材易于获取、易于保存、易于重复取样等，所以毛发检材的应用受到关注。其在药物滥用鉴定中的作用也已被确证和公认[1]。

　　由于毒品及其代谢物的极性或脂溶性不同，血液中的毒品及其代谢物扩散进入毛囊并融入毛发的能力也不同。一般脂溶性强(极性小)的组分进入毛发的能力强，如鸦片类毒品中的海洛因和6-单乙酰吗啡(均含酯结构);但血液中的这些成分很容易水解为吗啡。因此，血液中这些酯类成分的含量很低，且随着吸食时间的延长，浓度越来越低。最后可能只能检测到最终的代谢物吗啡，而检测不到原体或中间代谢物。由于吗啡也可由可待因代谢或由吸食吗啡产生，因此在生物检材中只检出吗啡，并不能证明是滥用了海洛因，有可能是由于服用了含有可待因或吗啡的药物导致，这样就使检测结果的证据力明显降低。为了提高海洛因滥用的证据力，6-单乙酰吗啡的检出是非常重要的。由于不同组分进入毛发的能力不同，使得海洛因代谢物在血液中的分布与在毛发中的分布不同[2]。血液中的成分以吗啡为主，而毛发中的成分以6-单乙酰吗啡为主[3]，因此毛发是证明滥用海洛因的最佳检材。

　　但是毛发是一个复杂组织，毒品进入毛发后，包埋在毛发的角蛋白中，首先需将其释放，呈游离状态才能进行提取和检测。又由于6-单乙酰吗啡很容易水解为吗啡，毛发的前处理过程不合适，会使得毛发中的6-单乙酰吗啡在此过程中转变为吗啡，从而使6-单乙酰吗啡的证据受到破坏。毛发中鸦片类毒品的的消解方法很多，有碱消解[4]、酸消解[5～8]、酶消解[9,10]和甲醇超声法[11～13]等。Rothe等[14]考察了10种溶剂直接消解提取毛发中鸦片类药物的效率，醇类的提取效果较好，其中甲醇最好。本研究通过对海洛因吸食者毛发和空白添加标准品毛发的碱消解、酸消解、甲醇超声提取、甲醇-5mol/LHCl超声提取、甲醇-三氟乙酸超声提取5种毛发中毒品及其代谢物的释放方法考察，确立了甲醇超声提取-液液萃取-气相色谱/质谱-选择离子检测的方法为稳定、有效的海洛因滥用者毛发中毒品及其代谢物的释放与检测方法。本方法操作简单，重复性好。

　　2 实验部分

　　2.1 仪器与试剂

　　7890A气相色谱仪，配有5975C质谱检测器(安捷伦公司);色谱柱为键合DB-5柱(30m×0.25mm，0.25μm);进样口温度250℃，柱箱起始温度150℃，保持1min，然后以20℃/min升至250℃，保持2.5min，再以30℃/min升至285℃，保持3min;氦气为载气，流速1.0mL/min，不分流。质谱检测器温度230℃，电子轰击离子源(EI)，电离能70eV。SIM测试中，定性监测离子为：乙基吗啡m/z296和409;6-单乙酰吗啡m/z364和423;吗啡为m/z69、364和477;可待因为m/z395和282。定量监测离子为：乙基吗啡m/z296;6-单乙酰吗啡m/z423;吗啡m/z364;可待因m/z395。

　　吗啡盐酸盐、可待因盐酸盐、6-单乙酰吗啡盐酸盐购于公安部物证鉴定中心，用甲醇溶解并配制成以游离碱计算的1.0g/L的标准品储备液，置于–20℃冷冻室中保存。不同浓度的工作液均由储备液稀释而成;N-甲基-双三氟乙酰胺(MBTFA)购于AcrosOrganics公司;三氟乙酸购于国药集团化学试剂北京有限公司;0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH9);实验中所用试剂均为分析纯;实验用水为纯净水。

　　2.2 毛发检材的预处理及制备

　　空白样品取自没有吸毒经历的24岁男子;吸毒者毛发是取自禁毒机构提供的39岁有2年海洛因吸毒史的男子。

　　分析化学第37卷第9期国菲等：毛发中海洛因代谢物的释放与分析方法研究依次用1%洗涤剂、蒸馏水超声振荡待检毛发10min，自然晾干，密封待检。准确称取清洗干燥后的空白和吸毒者毛发20mg数份，备用。

　　2.3 毛发检材的消解及提取

　　分别向空白毛发中加入6-单乙酰吗啡标准品和内标(乙基吗啡)0.1μg，混合均匀，制成添加6-单乙酰吗啡的毛发样品。分别采用5种方法：碱消解、酸消解、甲醇超声、甲醇-5mol/LHCl(20∶1,V/V)超声消解和甲醇-三氟乙酸(8.5∶1.5,V/V)超声进行消解，调pH=9后，加入6mL氯仿-异丙醇-正庚烷(50∶17∶33,V/V)提取溶剂[15]，超声10min，离心10min，取下清液，空气流下吹干，用80μL乙酸乙酯定容，然后加入20μLMBTFA在60℃烘箱中加热30min进行衍生化，冷却后直接抽取1μL进行GC/MS-SIM检测。

　　(1) 碱消解方法 向检材中加入1mL1mol/LNaOH，置于70℃水浴中加热30min，然后将消解液转移至15mL塑料离心试管中，加200μL5mol/LHCl,1mLpH9的磷酸盐缓冲液后提取检测;(2) 酸消解方法 向检材中加入1mL0.1mol/LHCl，45℃水浴过夜(12h)，然后将消解液转移至15mL离心试管中，加100μL1mol/LNaOH调pH后加入1mLpH9的磷酸盐缓冲液后提取检测;(3) 甲醇消解方法 向检材中加入1mL甲醇，60℃下超声振荡2h，然后将甲醇液转移至15mL离心试管中，加入1mLpH9的磷酸盐缓冲液后提取检测;(4) 甲醇-5mol/LHCl(20∶1,V/V)消解方法 向检材中加入1mL甲醇和0.05mL5mol/LHCl，50℃下超声振荡2h，然后将提取液转移至15mL离心试管中，用1mol/LNaOH调至中性，加入1mLpH9的磷酸盐缓冲液后提取检测;(5) 甲醇-三氟乙酸(8.5∶1.5,V/V)消解方法 向检材中加入850μL甲醇和150μL三氟乙酸，放置12h后，50℃下超声振荡2h，然后将提取液转移至15mL离心试管中，用1mol/LNaOH调至中性，加入1mLpH9的磷酸盐缓冲液后提取检测。空白毛发和真实吸毒者毛发预处理过程同上。

　　3 结果与讨论

　　3.1 消解条件对6-单乙酰吗啡水解的影响

　　考察了碱消解、酸消解、甲醇超声提取、甲醇-5mol/LHCl超声提取、甲醇-三氟乙酸超声提取5种消解方法，在20mg空白毛发中添加6-单乙酰吗啡和内标(乙基吗啡)，均为0.1μg，经消解后提取、衍生化和检测，其中检出的吗啡为6-单乙酰吗啡水解生成。计算吗啡与6-单乙酰吗啡的峰面积比，通过标准品比对计算它们的含量，并计算6-单乙酰吗啡的水解率。碱消解、酸消解和甲醇-5mol/LHCl消解均未检出6-单乙酰吗啡，即6-单乙酰吗啡的水解率为100%。甲醇-三氟乙酸消解检出微量6-单乙酰吗啡，其水解率为71.79%。甲醇消解检出更多的6-单乙酰吗啡，其水解率为2.63%。