背景与引言
在完成大麻素从干血斑中的提取方法优化后,本研究对娱乐性大麻使用者的干血斑样本进行了检测分析,并将结果与对应的静脉全血样本检测数据展开对比。
方法
采集娱乐性大麻使用者的血液(约20微升),滴加至定量干血斑滤纸条(德国普罗茨克公司DBSV型)上并进行干燥处理。提取方法优化的具体操作为:先将干血斑样本与50微升二甲基亚砜共孵育,再使用1毫升甲醇结合氘代标准品开展提取。针对四氢大麻酚和四氢大麻酚羧酸的定量检测,本研究对已发表的液相色谱 - 串联质谱法进行改良,采用爱博才思7500QTrap 质谱仪,在多反应监测模式下完成检测,配套使用捕集柱与分析柱(均为菲诺美公司产品,分析柱为KinetexC8柱,规格50×2.1毫米)。同时对伯尔尼大学SCRIPT预试验中收集的娱乐性大麻使用者干血斑及静脉全血样本进行了检测分析。
结果
干血斑滤纸条经二甲基亚砜孵育后再用甲醇提取,可将四氢大麻酚和四氢大麻酚羧酸的提取效率从15%提升至70%以上。本方法对四氢大麻酚的定量下限为0.25纳克/毫升、四氢大麻酚羧酸为1.25纳克/毫升,对应每份样本中分析物的含量分别为5皮克和2.5皮克;并在四氢大麻酚0.25~20纳克/毫升、四氢大麻酚羧酸1.25~100纳克/毫升的浓度范围内,实现了良好的线性校准。本研究测定得到方法的精密度与准确度指标:四氢大麻酚精密度4.6%、准确度17.2%,四氢大麻酚羧酸精密度6.1%、准确度11.3%。在首批54名受试者中,干血斑中四氢大麻酚的平均浓度为6.1±11.1纳克/毫升(中位浓度2.5纳克/毫升),四氢大麻酚羧酸的平均浓度为23.8±27.7纳克/毫升;干血斑与静脉全血中,四氢大麻酚的浓度比值为1.66±0.81,四氢大麻酚羧酸的浓度比值为1.04±0.56。
讨论
本研究成功实现了干血斑中四氢大麻酚及其代谢物四氢大麻酚羧酸的定量检测,干血斑与静脉全血的检测结果具有可比性。目前,研究团队仍在对二者的浓度比值展开进一步的分析验证。
结论
本研究采用甲醇提取前经二甲基亚砜孵育的优化提取方法,结合高灵敏度的液相色谱-串联质谱检测法,可实现对滤纸条采集并干燥的毛细血管血中四氢大麻酚与四氢大麻酚羧酸的定量检测。提取方法的优化是获得合适的定量下限的关键。为降低大麻素造成的外部污染风险,采集毛细血管血前需对受试者的皮肤进行有效清洁处理。