摘要 目的：应用高效液相色谱法测定复方曲马多片含量。方法：采用KromasilC18柱，以非那西丁为内标，甲醇－水－三乙胺（55∶45∶0.2）为流动相（冰醋酸调pH至4.2），检测波长为267nm，流速0.7ml/min。结果：曲马多线性范围为50～500μg/ml（r=0.9999，n=5）；奈福泮线性范围为50～500μg/ml（r=0.9999，n=5）。曲马多平均回收率为99.69％，含量测定结果为100.71％，RSD=0.76％（n=5）；奈福泮平均回收率为99.76％，含量测定结果为99.64％，RSD=0.62％（n=5）。结论：本方法简便、快速、灵敏，结果准确。

　　关键词 高效液相色谱法；曲马多；奈福泮；含量测定

　　曲马多（Tramadol,TR）和奈福泮(Nefopam,NFP)均为新型非成瘾性镇痛药，具有作用强、副作用小、无成瘾性等优点，但其作用强度不及吗啡、度冷丁等成瘾性镇痛药，限制了其临床应用范围。笔者在寻找能代替成瘾性镇痛药的复方制剂研究中，研制出了复方曲马多片。该药由TR和NFP与适量辅料按一定比例组方而成，动物实验表明，同等剂量下，其镇痛效果与吗啡相似。文献报道的NFP及其制剂的含量测定方法有紫外吸收光谱法、酸性染料比色法[1]、二阶导数光谱法[2]、高效液相色谱法（HPLC）[3，4]、气相色谱法[5]等；TR的分析方法主要有紫外吸收光谱法[6]、HPLC法[7～9]、气相色谱法[10]等。本文对常用的HPLC法进行考察，拟找出适合复方曲马多片的分析方法，并将所测结果与用非水溶媒滴定法所测结果进行比较。

　　1 实验材料

　　LC－6A高效液相色谱仪（日本岛津），SPD－6AV紫外－可见光分光光度检测器（日本岛津）。盐酸奈福泮（中美天洋药业有限公司）；盐酸曲马多（石家庄第一制药厂）；复方曲马多片（深圳市人民医院自制）；实验用试剂除甲醇为色谱纯外，其余均为分析纯。

　　2 实验方法

　　2.1 色谱条件

　　KromasilC18柱（Ф4.6mm×200mm，5μm）；流动相：甲醇－水－三乙胺（55∶45∶0.2），冰醋酸调pH至4.2；流速：0.7ml/min；检测波长：267nm；内标：非那西丁；量程：0.08AUFS；记录纸速：2mm/min。色谱图见图1。

　　2.2 系统适用性试验[11]

　　根据样品色谱图，以非那西丁计算理论塔板数n=6966，TR、NFP、非那西丁之间的分离度分别为8.87、4.16,表明3个峰之间分离度良好。

　　2.3 溶液的配制

　　标准溶液的配制：分别精密称取NFP、TR对照品100.0mg，置于100ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度。

　　内标溶液的配制：精密称取非那西丁50.0mg，置于100ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度。

　　2.4 标准曲线的绘制

　　分别精密量取NFP、TR标准溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，置于10ml容量瓶中，并各加入内标液0.5ml，流动相稀释至刻度，摇匀，即为系列浓度标准溶液，各进样3次，每次进样量20μl。以NFP浓度（C）对NFP标准品与内标物色谱峰面积之比（Ar/As）回归，得回归方程为：C=355.50Ar/As＋1.7876（r=0.9999），NFP在线性范围为50.0～500.0μg/ml之间与峰面积比值呈良好的线性关系；以TR浓度(C)对TR标准品与内标物色谱峰面积之比（Ar/As）回归，得回归方程为：C=209.77Ar/As—0.02203（r=0.9999），TR在线性范围为50.0～500.0μg/ml之间与峰面积比值呈良好的线性关系。

　　2.5 精密度考察

　　精密量取标准溶液NFP2.0ml、TR3.0ml，各5份，置于10ml容量瓶中，精密加入内标溶液0.5ml，用流动相稀释至刻度，各进样3次，每次进样量20μl，记录峰面积，NFP与内标Ar/As的平均值为0.5527，RSD％=0.62％；TR与内标Ar/As的平均值为1.4462，RSD％=0.76％，表明精密度良好。

　　2.6 回收率试验

　　精密称定105℃干燥至恒重的NFP和TR适量，各6份，分别加入处方量辅料，混合，置于50ml容量瓶中，加水振摇，使NFP与TR溶解完全，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液过0.45μm微孔滤膜，取滤液2.0ml置于10ml容量瓶中,加内标0.5ml,流动相稀释至刻度，每次进样20μl,色谱条件和测定方法与“2.4”项下方法相同，结果TR的平均回收率为99.69％，RSD=0.46％；NFP的平均回收率为99.76％，RSD=1.05％。

　　2.7 样品含量测定

　　2.7.1 校正因子的测定：精密量取标准溶液NFP2.0ml、TR3.0ml,置于10ml容量瓶中，精密加入内标溶液0.5ml，用流动相稀释至刻度，取20μl进样，记录峰面积。标准品和内标物的峰面积（Ar，As)及标准品和内标物的量（mr，ms）按《中国药典》方法[11]计算校正因子（f），结果TR的f值为8.3125，RSD=1.36％；NFP的f值为14.3935，RSD=1.55％。

　　2.7.2 样品含量测定结果：取复方曲马多片粉末适量，溶于50ml容量瓶中，充分溶解，过滤，取续滤液2.0ml，置于10ml容量瓶中，加0.5ml内标溶液，并用流动相稀释至刻度，取20μl进样，记录峰面积。样品与内标物的峰面积（Ai，As）及样品的量（mi）按《中国药典》方法[11]计算含量，结果见表1、表2。

　　2.8 与非水溶媒滴定法所测结果比较

　　用非水溶媒滴定法对TR、NFP原料的含量进行测定，所测结果与用HPLC方法所测结果进行比较，结果见表3。

　　3 讨论

　　HPLC法具有灵敏度高、分辨率高、可同时进行分离及分析的优点，适用于复方制剂的分析。复方曲马多片中NFP与TR的溶解度及pKa值不同，通过调整流动相中甲醇、水的比例及用冰醋酸调pH值为偏酸性，使复方曲马多片中NFP、TR得到了很好的分离及分析。用非水溶媒滴定法对TR、NFP原料的含量进行测定，与用HPLC法所测结果进行比较，两种方法所测含量结果基本一致，说明HPLC法用于复方曲马多片的含量测定灵敏、结果可靠。

　　参考文献：

　　[1] 陆兵，石庭森.酸性染料法测定盐酸平痛新含量[J].药物分析杂志，1995，15（1）：54.

　　[2] 陈合山.紫外导数光谱法测定盐酸平痛新片剂含量[J].药物分析杂志，1991，11（3）：173.

　　[5] 陆兵，石庭森.气相色谱法测定血浆中平痛新[J].药物分析杂志，1995，15（6）：22.

　　[6] 杨玉芝，雷玉斌.紫外分光光度法测定盐酸曲马多注射液的含量[J].药物分析杂志，1996，16（2）：132.

　　[7] 钟玉莲.高效液相色谱法测定盐酸曲马多缓释片的含量[J].药物分析杂志，1997，17（4）：279.

　　[9] 孙国庆，朱颖,谷丽，等.反相高效液相色谱－荧光法检测血清中盐酸曲马多[J].中国药科大学学报，1996，27（8）：476.

　　[10] 谢晓婵，杨尊湘，李景苏，等.用气相色谱法研究盐酸曲马多片在人体内相对生物利用度[J].中国药学杂志，1994，29（11）：671.

　　[11] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典[S].二部.2000年版.北京：化学工业出版社，2000：附录32.