【摘要】 目的：比较国产和进口盐酸曲马多片在人体内的药物代谢动力学和生物等效度，确保临床用药质量。方法：18例男性健康受试者采用标准二阶段自身交叉对照试验法服用药物，以高效液相色谱荧光法测定受试者服药后24 h内血清中曲马多经时浓度,计算曲马多的药动学参数,并将数据作统计学处理。 结果：国产和进口盐酸曲马多的血药达峰时间Tmax（实测值）分别为（2.3±0.7）和（2.3±0.7） h，峰值血清浓度Cmax（实测值）分别为（223±79）和（229±65）μg·L-1，药时曲线下面积AUC（0 24h）分别为（2173±680）和（2252±597）μg·h·L-1，两种盐酸曲马多片上述药动学参数间均无统计学差异（P>0.05），国产对进口盐酸曲马多片的相对生物利用度为96.40%.。结论：两种制剂在人体内具有生物等效性.

　　【关键词】 盐酸曲马多；药代动力学；生物利用度；色谱法，高压液相

　　盐酸曲马多是一种中枢性非麻醉镇痛药，其主要作用于中枢神经系统与疼痛相关的特异性受体，无致平滑肌痉挛和呼吸抑制作用，镇痛作用可维持4~6 h，具有较强的镇痛作用，适用于各种原因引起的急、慢性疼痛. 本品耐受性和依赖性很低，易被患者所接受. 为评价国产盐酸曲马多片在人体内的生物效应，我们采用二阶段自身交叉对照的试验方法，对进口和国产盐酸曲马多片在健康志愿者体内的药物代谢动力学和生物等效度进行了比较，旨在为临床合理用药［1-5］提供理论依据.

　　1 对象和方法

　　1.1 对象  ①对象：18名男性健康志愿者，平均年龄（24.22±3.23）岁，经体检（血尿常规、肝肾功能及心电图检查等指标）均正常，受试者实验前2 wk及实验期间未用过其他任何药物，无药物过敏史，实验期间禁烟、酒及含药物、乙醇的饮料等，并签署知情同意书. ② 仪器：LC 10AVP高效液相色谱系统（Shimadzu， Japan），含两台LC 10ATvp型泵，7725型进样阀（配100 μL定量环），RF 10AXL荧光检测器，CTO 10Asvp柱箱，Class vp 5.032色谱工作站(Shimadzu，Japan)，Hypersil C18不锈钢分析色谱柱（150 mm×4.6 mm， 5 μm）. ③ 试验药品：受试品盐酸曲马多片由石家庄制药集团有限公司生产（50 mg/片），参比品：进口盐酸曲马多片（50 mg/片），盐酸曲马多对照品由石家庄制药集团有限公司提供（含量99.6%）. 乙腈为色谱级，磷酸等均为分析纯.

　　1.2 色谱条件  Hypersil C18不锈钢分析色谱柱（150 mm×4.6 mm， 5 μm）；流动相为乙腈：（0.05 mol·L-1, pH=3.8）磷酸缓冲液=30∶70,流速1.2 mL·min-1，荧光检测波长Ex=275 nm，Em=304 nm.

　　1.3 方法

　　1.3.1 血清样品测定  精取样品血清1.0 mL于尖底10 mL的离心试管中，精密加入0.5 mL的NaOH溶液（0.5 mol·L-1），漩涡混合1 min，加入5.0 mL的乙酸乙酯萃取液，漩涡振荡提取3 min，离心10  min（4000 r·min-1），精取上层有机相4.0 mL于另一离心管中，置40℃水浴上，以氮气吹干，加流动相150 μL定溶，取100 μL进样，外标法定量，Class vp5.032色谱工作站自动计算并打印曲马多的色谱峰面积，将峰面积代入标准曲线方程，求出曲马多的血清浓度.

　　1.3.2 标准曲线制备  取空白混合人血清1.0 mL共7份，分置于试管中，加入适量曲马多标准液，使血清中曲马多浓度依次分别为400.00, 200.00, 100.00, 50.00, 25.00, 12.50和6.25 μg·L-1，按上述血清样品测定方法操作，以曲马多的血清浓度C （μg·L-1）对曲马多的色谱峰面积（A）作线性回归，求得标准曲线方程为：C=1.8370×10-4 A- 0.8364  (r =0.999, n=6).

　　1.3.3 回收率  取空白血清3份，加入适量的曲马多标准液，分别配成低、中、高3个浓度的曲马多样品12.50, 50.00和200.00 μg·L-1，按样品测定法各测定含量6次，计算方法回收率，结果分别为（94.32±1.86）%, （94.29±1.26）% 和（93.74±0.59）%.

　　1.3.4 精密度  取空白血清加入适量曲马多标准液，配制成低、中、高浓度分别为12.50, 50.00和200.00 μg·L-1血清样品，在1 d内按样品测定法重复测定6次，求得曲马多日内RSD分别为3.75%, 2.29和1.21%. 将上述3浓度的样品在8 d内陆续各重复测定6次，求得对应的日间RSD分别为5.18%,  2.87%和1.53%.

　　1.3.5 样品稳定性试验  将高、中、低3个浓度（12.50, 50.00和200.00 μg·L-1）的曲马多血清样品分别置于-20℃冰冻2 wk后于37℃条件下解冻，按前述方法测定曲马多血清浓度变化（n=6），计算冰冻2 wk及冻融对样品稳定性影响，求得冰冻前后浓度变化比率分别为（99.97±1.61）%, （100.20±1.33）%, （100.42±1.27）%.

　　1.4 试验设计  以标准二阶段交叉自身对照试验法，将18名志愿者随机分为两组. 试验第1阶段第1组受试者口服进口盐酸曲马多片100 mg，第2组口服国产盐酸曲马多片100 mg. 经1 wk清洗期后，两组交换服药品种进行第2阶段试验. 每次试验前晚禁食12 h，试验当日晨空腹用200 mL温开水吞服药物. 在服药后的第4小时进食统一低蛋白、低脂肪标准午餐. 受试者口服药物前抽取空白血样5 mL，在服药后0.5, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 16, 20和24 h分别采静脉血5 mL，置无菌干燥试管中，离心分离出血清置于无菌干燥塑料管中，于-20℃保存待测.

    统计学处理：18例健康志愿者的血药浓度 时间原始数据用中国药理学会编制的实用药代动力学计算程序3P87处理，求算药代动力学参数. 以梯形法求算AUC ，Tmax和Cmax 均采用实测值，用孙瑞元等编制的NDST21W统计学软件，将两种制剂中曲马多的AUC（0 24 h）, AUC（0 inf）, Cmax和Tmax进行配对双单侧t检验（AUC和Cmax先经对数转换），进行生物等效性评价.

　　2 结果

　　2.1 色谱行为  在本色谱条件下，曲马多保留时间为5.03 min，曲马多与血清组分离效果良好，无杂质干扰，可确保分析方法的专一性(Fig 1). 血清中曲马多的最低检出浓度（按信噪比≥3计）为3 μg·L-1.

　　图1 曲马多色谱图 （A）曲马多标准（B）空白人血清（C）样品血清　(略)

　　2.2 血药浓度测定  用HPLC法测定18名志愿者口服两种盐酸曲马多片后不同时间血清中的曲马多浓度，口服受试品国产曲马多片组与口服参比品进口盐酸曲马多片中曲马多的达峰时间基本一致（以实测值相比）,曲马多浓度 时间变化趋势基本一致，但两种制剂的血药浓度值及个体间血药浓度值存在一定的差异(Fig 2).

　　2.3 药代动力学参数18例受试者血药浓度 时间原始数据用3P87程序处理，得主要药代动力学参数见Tab 1. 结果表明，两种曲马多片在人体内的代谢过程均呈一室开放模型.

　　2.4 两制剂的相对生物等效度分析  以梯形法求算两种曲马多片的AUC（0 24 h）和AUC（0 inf），Cmax 和Tmax采用实测值，将两种曲马多片的AUC（0 24 h）, AUC（0 inf）, Cmax和 Tmax进行配对双单侧t检验（AUC和Cmax先经对数转换），国产的曲马多片相对于进口的曲马多片生物利用度为96.40%，两种曲马多片制剂在人体具有生物等效性.
 
　　图2 口服100 mg盐酸曲马多片后血清中曲马多的药时曲线　(略)

　　表1 口服100 mg盐酸曲马多片后药代动力学参数　(略)

　　3 讨论

　　以HPLC测定血清中曲马多的方法国内外均有报道［6-9］，一般多采用液液萃取、C18柱分离、荧光检测的方法. 鉴于曲马多的溶解特性，碱化血清样品是影响药物回收率的重要因素，在碱性条件下用有机溶剂（乙酸乙酯、乙醚等）萃取，可达到有效的提取. 经比较参考文献报道的方法，最终我们选择了在碱性条件下以乙酸乙酯萃取血清样品，去除内源性蛋白等干扰杂质，挥干，流动相溶解后进样分析，结果表明在本试验色谱条件下，内源性杂质较少，灵敏度高，确保了分析方法的专一性和分析结果的准确性.

　　从曲马多血药浓度的测定结果可见，18例受试者服用受试品和参比品后，两组之间各参数间均无显著性差异（P>0.05），说明两种盐酸曲马多片在18例健康受试者体内的处置情况较为相似. 18例受试者的Cmax和AUC(0 24 h)个体间的差异较大，但同一受试者服用受试制剂和参比制剂后的Cmax和AUC(0 24 h)相近，提示盐酸曲马多片的个体差异较大，临床使用时应结合治疗药物监测结果，进行个体化用药.

　　从两种盐酸曲马多片的生物等效性分析结果可见，两种盐酸曲马多片的Cmax（实测值）、Tmax（实测值）和以梯形法求得的AUC（0 24 h）间的配对双单侧t检验结果均表明，两种盐酸曲马多片在人体内具有生物等效性，受试品（国产盐酸曲马多片）相对于参比品（进口盐酸曲马多片）的相对生物利用度为96.40%，两种制剂在人体内具有生物等效性.

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　　第四军医大学西京医院药剂科，陕西 西安  710033