【摘要】目的：观察α2受体阻断剂育亨宾在脊髓水平对氯胺酮镇痛作用的影响。方法：将小鼠按照甩尾法组和扭体法分为两大组，每大组再分为6小组，每组10只：生理盐水组（NS组）、氯胺酮组（Ket组）、15μg育亨宾组（Yoh15组）、5μg育亨宾组(Yoh5组)、氯胺酮与15μg育亨宾合用组和氯胺酮与5μg育亨宾合用组(Ket+Yoh15组、Ket+Yoh5组）。用甩尾法和扭体法观察鞘内注射不同浓度的育亨宾对氯胺酮镇痛作用的影响。结果：皮下注射氯胺酮产生明显镇痛作用(P<0.01)；单独鞘内注射以上两个剂量的育亨宾对小鼠的甩尾痛阈和扭体次数无明显影响(P>0.05)；两种方法中，鞘内注射15μg的育亨宾可显著减弱氯胺酮的镇痛作用(P<0.01)；注射5μg的育亨宾虽对氯胺酮镇痛小鼠甩尾痛阈无明显影响(P>0.05)，却使氯胺酮镇痛小鼠的扭体次数增加(P<0.05)。结论：氯胺酮镇痛作用和脊髓去甲肾上腺素α2受体密切相关。

　　【关键词】氯胺酮；育亨宾；甩尾法；扭体法；镇痛；机制

　　氯胺酮(ketamine,Ket)是临床常用的静脉麻醉药,也是惟一具有确切镇痛作用的静脉麻醉药,具有起效迅速、镇痛作用强、毒性反应低的特点［1-2］。氯胺酮镇痛作用的机制目前尚未完全阐明，已知与抑制兴奋性氨基酸N2-甲基-D2天冬氨酸（NMDA)受体、阿片受体等有关［3］,促进脊髓释放去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)也是氯胺酮抗伤害机制的重要组成部分［4］。同时，氯胺酮可激活脊髓γ-氨基丁酸(GABA)抑制性神经元上的α1受体使该类神经元除极,导致GABA的释放增加,从而使脊髓抑制性突触传递加强。但氯胺酮镇痛作用是否和脊髓去甲肾上腺素α2受体有直接关系，尚未见报道。本研究在此方面进行了实验观察。

　　1 材料和方法

　　1.1 动物和分组  昆明种小鼠，体重20～25g，由徐州医学院实验动物中心提供。分为两大组：热水甩尾法组和扭体法组。每大组有筛选合格的小鼠60只（筛选方法见下）再分为6小组：生理盐水组（NS组）、氯胺酮组（Ket组）、15μg育亨宾组（Yoh15组）、5μg育亨宾组(Yoh5组)、氯胺酮与15μg育亨宾合用组和氯胺酮与5μg育亨宾合用组(Ket+Yoh15组、Ket+Yoh5组）。使各组雌雄比例和体重均衡。

　　1.2 药品和仪器  盐酸氯胺酮注射液(江苏恒瑞医有限公司,批号:KH071001)；育亨宾(productofUSΑMSDS,批号:122K0369)。两药均用去离子水稀释成所需浓度。快速恒温数显水箱,由常州国华电器有限公司研制。

　　1.3 实验方法

　　1.3.1 鞘内注射方法  按压小鼠腰骶两侧固定，自L5～L6间进针，以鼠尾突然出现侧向运动为注射成功标志。注射容积为5μl，注射时间为10s，留针20s。

　　1.3.2 热水甩尾法  将恒温水浴箱加热到（48±0.5）℃,用标记笔在小鼠尾巴的下1/3做一标记，把标记以下部分浸入水中，记录尾巴自进入水中到甩出水面的时间，测两次取平均值作为基础痛阈，将基础痛阈<1s或>15s的小鼠淘汰。筛选符合实验要求的60只小鼠，随机分成6组，每组10只，各组给药方法如下：NS组皮下注射生理盐0.1ml/10g，Ket组皮下注射氯胺酮30mg/kg，两组分别在第1次给药5min后鞘内注射人工脑脊液5μl/只；Yoh15组和Yoh5组，皮下注射生理盐水0.1ml/10g，5min后分别鞘内注射相应剂量的育亨宾；Ket+Yoh合用组，皮下注射氯胺酮30mg/kg，5min后鞘内注射相应剂量的育亨宾。各组第2次注药后用甩尾法测5、10、15、20、25min的痛阈。

　　1.3.3 扭体法  60只小鼠随机分成6组，每组10只，将上述分组中NS组换成冰醋酸组，其他分组同上。各组给药方法如下：冰醋酸组皮下注射生理盐水0.1ml/10g，Ket组皮下注射氯胺酮30mg/kg，两组分别在第1次给药5min后鞘内注射人工脑脊液5μl/只；Yoh组皮下注射生理盐水0.1ml/10g，5min后鞘内注射育亨宾15μg或5μg；Ket+Yoh合用组，皮下注射氯胺酮30mg/kg，5min后鞘内注射育亨宾15μg或5μg。以上各组第2次给药5min后腹腔注射0.6%的冰醋酸0.2ml/只，记录15min内小鼠扭体的次数。

　　1.4 统计学处理  采用SPSS15.0统计软件进行处理，数据以±s表示。两组比较采用成组t检验,多组比较采用单因素方差分析（One-wayANOVA）,检验水准α=0.05。

　　2 结果

　　2.1 甩尾法  实验结果见表1。皮下注射氯胺酮产生镇痛作用（P<0.01），且可持续20min；单用Yoh组痛阈和NS组无明显差别（P>0.05）；Ket+Yoh15组在10min、15min和20min的痛阈短于Ket组（P<0.01），而Ket+Yoh5组只有在10min时痛阈短于Ket组（P<0.05）。

    表1 育亨宾对氯胺酮镇痛作用的影响（略）

    与NS组比较：**P<0.01；与Ket组比较：△P<0.05，△△P<0.01

　　2.2 扭体法  实验结果见表2。Ket组较冰醋酸组扭体次数减少（P<0.01），说明氯胺酮产生镇痛作用；单用Yoh组与冰醋酸组无明显差别（P>0.05）；Ket+Yoh15组的扭体次数多于Ket组（P<0.01），与冰醋酸组无差异（P>0.05）；Ket与Yoh5组的扭体次数也多于Ket组（P<0.05），却未增加到冰醋酸组水平（P<0.05）。

    表2 育亨宾对氯胺酮镇痛作用的影响（略）

    与冰醋酸组比较：*P<0.05，**P<0.01；与Ket组比较：△P<0.05，△△P<0.01

　　3 讨论

　　麻醉药的作用机制是一项重要的研究课题，不少学者就此方面进行了广泛深入的探讨。氯胺酮非选择性地作用于NMDΑ受体产生镇痛作用。除此之外，氯胺酮的镇痛作用还与阿片受体、甘氨酸受体有关［5-6］。近年来，中枢α肾上腺素受体（α-adrenergicreceptors,α-AR）与镇痛的关系越来越受重视。α-AR可分为α1、α2两型，其中α1-AR对哌唑嗪（阻断剂）和去氧肾上腺素（激动剂）选择性高，而可乐定及育亨宾则分别为α2-AR的激动剂和阻断剂。以往的研究表明，就疼痛的关系而言，α2-AR较α1-AR更为重要［7-8］。α2-AR在脊髓和脑内均有分布，在动物的行为学实验中发现无论是使用α2-AR的激动药产生镇痛作用，还是使用α2-AR的阻断药产生对抗镇痛药的作用，脊髓用药远低于外周给药，因此在痛觉调制过程中，脊髓的α2-AR起着重要的作用。Kawamata等［4］和Sonoda等［9］发现腹腔注射氯胺酮明显增加大鼠脊髓背角NA的释放量，预先鞘内注射育亨宾可缩短氯胺酮镇痛大鼠的甩尾潜伏期。因此，氯胺酮的镇痛作用可能部分源于促进脊髓释放NA，进而作用于α2受体。本实验甩尾法结果显示，鞘内注射较大剂量育亨宾（15μg）明显拮抗氯胺酮的镇痛作用，说明脊髓α2受体参与氯胺酮的体表抗热刺激的镇痛作用,这与以往的实验结果一致。较小剂量育亨宾（5μg）几乎不拮抗氯胺酮的镇痛作用，可能是阻断药的剂量不足。在已有的研究中较少用到扭体法，在本实验中两个剂量的育亨宾均对氯胺酮的镇痛作用有所拮抗，说明氯胺酮抗脏器损伤的镇痛作用也与脊髓α2-AR相关，甚或与此受体关系更为密切。对于氯胺酮镇痛的作用机制还不能从一个作用靶点来完全阐述，并且在文献中还存在争论甚至完全不同的结果，还需要以后作进一步的研究和探讨。

　　【参考文献】

　　［1］黄坚, 莫家全, 麦伟良, 等. 术前硬膜外应用氯胺酮对术后镇痛的影响［J］. 国际医药卫生导报, 2005, 11(10): 82.

　　［2］唐显玲. 非巴比妥类静脉麻醉药［M］∥戴体俊.麻醉药理学.2版. 北京:人民卫生出版社,2005:179-184.

　　［3］李惠萍，吴钢，韦成全，等. 氯胺酮镇痛作用与3种受体的关系［J］.　解放军医学杂志,2007，32（10）：1048-1050.

　　［4］Kawamata T, Omote K, Sonoda H， et al. Αnalgesic mechanisms of ketamine in the presence and absence of peripheral inflammation ［J］. Αnesthesiology, 2000, 93 (2):520 -528.

　　［5］曾维安.椎管内应用镇痛药物的问题和展望［J］.实用疼痛学杂志，2005，1（2）：120-123.

　　［6］冉菊红, 马民玉. 椎管内用药的镇痛机制及相互作用［J］.河南外科学杂志，2004，10（6）：51-53.

　　［7］Pertovaara A. Antinociception induced by alpha-2-adrenoceptor agonists，with special emphasis on medetomidine studies［J］. Prog Neurobiol, 1993，40(6): 691-709.

　　［8］Brandt SA, livingston A. Receptor changes in the spinal cord of sheep associated with exposure to chronic pain ［J］. Pain, 1990,42(3):323-329.

　　［9］Sonoda H, Omote K. Analgesia mechanism of ketamine ［J］. Masui, 1996,45(6):389-397.