1 资料与方法

　　1.1 试验分组 外周血取自正常志愿者，年龄为25±5岁，均无近期感染史、过敏史及使用免疫抑制剂史。全血收集在EDTA抗凝的试管内，分装在EP管中，每管取100μl全血。试验分为单独药物组（A 1 组:氯胺酮200μg/ml和A 2 组:氯胺酮2μg/ml组）、激活组（B 1 组:氯胺酮200μg/ml+LPS100ng/ml组和B 2 组:氯胺酮2μg/ml+LPS100ng/ml组）和对照组（C 1组:空白对照组和C 2 组:LPS对照组），共6组。检测7份人外周血标本。各组加入上述试剂，用PBS补齐体积后，在37℃下孵育6h。离心2000rpm、10min，去除 血细胞，上清液收集在EP管中，储藏在-70℃待用。

　　1.2 药品和试剂 脂多糖（Escherichia coli0111:B4）和人TNF-αELISA试剂盒均购自于晶美生物技术有限公司。

　　1.3 检测方法 血浆TNF-α浓度用人TNF-αELISA试剂盒检测。这些试剂盒的板内、板间变异系数均<9.6%，可检测人TNF-α的最小值分别为10pg/ml。

　　1.4 统计学处理 所有数据均用均数±标准差（X±s）表示，采用SPSS10.0统计软件进行处理。组间比较用单因素方差分析并用q检验进行两两比较。P<0.05为差异有显着性。

　　2 结果

　　2.1 单独用氯胺酮抑制TNF-α的表达 本试验用两组不同浓度的氯胺酮（200μg/ml和2μg/ml）来检测其对TNF-α的影响。结果显示:单独药物组（A 1 和A 2 组）TNF-α的浓度分别为131.4和204.3pg/ml，低于空白对照组（C 1 组，TNF-α的浓度为278.6pg/ml）（P<0.01;P<0.05）。故单独的氯胺酮可抑制TNF-α表达，即氯胺酮可抑制静息状态下TNF-α的表达。

　　2.2 氯胺酮抑制LPS诱导的TNF-α的表达 全血用LPS刺激后，TNF-α的浓度为1225.7pg/ml，明显高于空白对照组（C 1 组，278.6pg/ml）（P<0.01）。在加氯胺酮孵育并用LPS刺激后，表1显示了氯胺酮对LPS诱导的TNF-α的表达的影响。当用氯胺酮孵育6h后，它们明显抑制LPS诱导的TNF-α的表达（P<0.01），且高剂量的氯胺酮对LPS诱导的TNF-α的抑制作用大于低剂量的氯胺酮的作用。

　　表1 氯胺酮对LPS诱导的TNF-α表达的影响(略）

　　注:与LPS对照组比较: △△ P<0.01， △ P<0.05，与空白对照组比较: P<0.01

　　3 讨论

　　氯胺酮广泛用于麻醉及癌症病人的镇痛。近来研究表明，氯胺酮是一种免疫调节剂，长期使用氯胺酮可影响免疫系统，导致机会性感染 ［3］ 。我们的研究显示:氯胺酮能抑制人外周血中LPS诱导的TNF-α和IL-6的产生。有资料表明，在LPS刺激后，机体首先产生TNF-α，然后引起巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞和内皮细胞分泌IL-6等其它细胞因子 ［4］ 。氯胺酮的这种抑制效应的机制尚不明确，可能是通过抑制核转录因子-κB（NF-κB）的活性来实现的 ［5］ 。

　　研究表明，氯胺酮可抑制动物体内TNF-α和IL-6的产生。皮下注射氯胺酮可减少TNF-α的产生，且这种效应呈剂量依赖关系 ［6］ 。在小鼠的腹膜巨噬细胞中，μM级浓度的氯胺酮抑制LPS诱导的TNF-α和IL-6的产生，而nM 级的氯胺酮却增加TNF-α和IL-6的产生 ［6］ 。后者与我们的结果不一致。可能是由于高浓度的LPS（10μg/ml，为本试验的100倍）的诱导效应遮盖了低剂量氯胺酮的作用。

　　μM和nM的氯胺酮对TNF-α和IL-6的抑制效应具有重要的临床意义，曾有报道，经高浓度氯胺酮治疗后，其血浆浓度可达到5μM。

　　总之，我们的研究显示:氯胺酮能抑制人外周血中LPS诱导的促炎因子TNF-α和IL-6的产生。其机制有待进一步探讨。

　　参考文献：

　　1 Marano MA，et al.Serum cachectin/tumor necrosis factor in critically ill patients with burns correlates with infection and mortality.Sury Gynecol Obstet，1990，170:32-38.

　　2 Meade P，et al.Temporal patterns of hemodynamics，oxygen transport，cytokine activity and complement activity in the development of adult respiratory distress syndrome after severe injury，JTrauma，1994，36:651-657.

　　3 Kawasaki T，et al.Ketamine suppresses proinflammatory cytokine proˉduction in human whole blood in vitro.Anesth Analg，1999，89:665-669.

　　4 Welters I，et al.NF-κB，nitric oxide and opiate signaling.Medical Hyˉpothese，2000，54（2）:263-268.

　　5 Bencsics，et al.Effect of morphine on LPS-inducedTNF-αproduction in vivo:involvement of the sympathetic nervous system.J Neuroimmunolˉogy，1997，73（1-2）:1-6.

　　6 Roy S，et al.Morphine modulates NF-κB activation in macrophages.Biochem Biophy Res Commun，1998，245:392-396.

　　7 Wolff T，et al.Morphine and morphine metabolite concentration in cereˉbrospinal fluid and plasma in cancer Pain patients after slow-release oˉral morphine administration.Pain，1995，62:147-154.

　　作者单位:430071武汉大学中南医院麻醉科