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戒毒专家—杜新忠记事 《中国禁毒工作》
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大麻与烟草
稳定表达大麻受体2的CHO细胞株的构建
烟草与大麻
2009-07-10 07:55:02 来自:李素燕 颜玲娣 徐波 宫泽辉 作者:中国药理学与毒理学杂志 阅读量:1

  目的:建立稳定高效表达人重组大麻受体2(CB2)的中国仓鼠卵巢(CHO-K1)细胞株,为体外高通量筛选CB2激动剂和拮抗剂奠定基础。

  方法:通过脂质体介导的方法将构建的表达载体pcDNA3.1(+)-CB2转染入CHO-K1细胞中,然后用含G418的选择性培养液进行筛选,挑取耐药克隆;培养并收集耐药克隆细胞,用RT-PCR方法做进一步筛选;序列测定鉴定整合基因的序列;筛选的阳性克隆用放射性配体-受体结合实验进行进一步的鉴定和受体活性分析。

  结果:转染细胞在含G418的选择性培养基中生长出28个耐药单克隆,用RT-PCR方法检测出17个CB2 mRNA表达量较高的阳性克隆;RT-PCR扩增片段测定鉴定正确;挑选其中最优的克隆进行放射性配体-受体结合实验,结果显示,表达受体具有与CB2激动剂WIN55212-2特异结合的活性,其Kd和Bmax值分别(1.21±0.47)nmol·L-1和(3.12±0.7)nmol·g-1蛋白,这一结果与天然CB2的特性相似。

  结论:建立了稳定高效表达人重组CB2的CHO-K1细胞株。

  关键词:大麻受体2 基因转染 CHO细胞

[责任编辑]杜新忠
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