【摘要】目的　探讨长期静脉注射海洛因对人体细胞免疫功能的影响。方法　以T细胞亚群、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）及一氧化氮（NO）为指标, 检测22例长期静脉注射海洛因患者的细胞免疫功能改变，并与正常人相对照。结果　海洛因依赖者外周血中的CD+4T细胞数(29.1±12.7)较对照组（53.0±10.1）降低，CD+4／CD+8比值倒置，有丝分裂原诱导的IL-2水平（37.8±11.4 μg/L）较对照组（3.8±0.6 μg/L）降低，IL-6水平(55.0±10.4 mg/L)较对照组（2.9±0.5 mg/L）增高，NO含量（71.1±13.3 μmol/L）较对照组（54.6±17.7 μmol/L）增高。结论　长期使用海洛因可抑制人体的细胞免疫功能，辅助性T淋巴细胞1和辅助性T淋巴细胞2之间的功能失调可能是其细胞免疫功能抑制的中介因素之一。

　　【关键词】海洛因依赖　白细胞介素2　白细胞介素6　一氧化氮　T淋巴细胞亚群

　　在人类免疫缺陷病毒(HIV)感染流行以前，人们就已观察到海洛因能损害人体免疫功能。近几年又有资料表明，静脉吸毒者HIV感染的机率大于非吸毒者，且海洛因可加速HIV感染发展成获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的进程［1］。提示海洛因依赖者的细胞免疫功能可能受损。我们在动物实验的基础上［2］，拟对静脉注射海洛因者的外周血T细胞亚群、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）及一氧化氮（NO）的水平进行检测，从CD+4TH细胞分泌的细胞因子间接了解TH1和TH2细胞间的平衡关系，并以此进一步探讨海洛因的免疫机制。

　　一、对象

　　1. 患者组：共25例，来自湖南省戒毒所和湖南省浏阳市戒毒所，均符合美国精神障碍诊断与统计手册第4版(DSM-IV)物质所致依赖的诊断标准，有确切的海洛因滥用史，连续静脉注射海洛因≥3个月，吸毒时间≥6个月，既往无重大躯体疾病及肝炎、结核病史，无服用激素类药物治疗史，HIV血清学检测阴性。25例中男18例，女7例，年龄25±4岁，平均吸食海洛因时间25±16月，最近1周海洛因静脉注射量为0.36±0.10 g/d。

　　2. 对照组：共10名，均为本所医护人员，既往无重大躯体疾病及肝炎、结核病史，无服用激素类药物治疗史，HIV血清学检测阴性，最近6个月没有重大生活事件。10名中男6名，女4名，年龄25±4岁。

　　两组之间年龄(t=0.20, P>0.05)和性别(χ2=0.72, P>0.05)的差异无显著性。

　　二、方法

附表　海洛因组与对照组人体细胞免疫功能有关指标的比较(±s)

组别	例数	IL-6 (mg/L)	IL-2 (μg/L)	NO (μmol/L)	CD+4T	CD+8T	CD+4/CD+8
海洛因	25	55.0±10.4	37.8±11.4	71±13	29±13	34±11	0.88±0.32
对照	10	2.9±0.5	3.8±0.6	55±18	53±10	37±5	1.49±0.41
t值		4.16	4.19	2.65	5.8	0.84	4.18
P值		＜0.01	＜0.01	＜0.05	＜0.05	＞0.05	＜0.01

　　1.主要试剂:人CD+4、CD+8McAb和兔抗鼠IgG荧光抗体(北京医科大学免疫学教研室提供)，IL-2试剂盒(中国科学院上海原子核研究所提供)，IL-6试剂盒(西安第四军医大学免疫学教研室提供)；细胞培养基RPMI 1640 (美国Gibco公司提供)；植物血凝素(PHA，广州医药工业研究所提供）；淋巴细胞分离液Ficoll-Hypaque （上海试剂一厂生产）。

　　2.检测指标和方法：（1）外周血淋巴细胞的分离（PBLC分离）：采外周血10 ml，肝素抗凝，经Ficoll-Hypaque密度梯度离心2 000 r×20 min，吸取界面PBLC层，经Hank′s液洗2次(1 000 r×10 min)，RPMI-1640洗1次(1 000 r×10 min)，去上清，加RPMI-1640完全培养基(10%FCS 、1 mm/L谷氨酸胺、青霉素100 U/ml、链霉素100 U /L）， 调细胞浓度至2×106/ml, 台盼蓝染色测定细胞生存率大于95%。

　　3.IL-2的诱生：取2×106/ml PBLC加入24孔培养板，加入PHA至终浓度为200 μg/ml，置37℃、5%CO2培养箱孵育72小时, 离心、收集上清，贮存-40℃待测。

　　4.IL-6及NO的诱生：取2×106/ml PBLC加入24孔培养板，加入LPS至终浓度为10 ng/ml, 加PHA至终浓度为200 μg/ml，置于37℃，5%CO2培养箱孵育72小时, 离心、收集上清，贮存-40℃待测。

　　5.CD的检测：采用间接免疫荧光法检测T淋巴细胞亚群CD+4T细胞、CD+8T细胞，原理为抗核抗体与核抗原结合形成抗原抗体复合物，洗涤后再加上羊抗人IgG荧光抗体形成荧光素标记的抗原抗体复合物，此复合物在荧光显微镜下呈现荧光。

　　6.IL-2的检测：采用放射免疫法检测IL-2的水平，原理为被测抗原(Ag)、放射性同位素标记的抗原(Ag*)和有限量的抗体(Ab)竞争结合，找出Ag～Ag*Ab关系(标准曲线)以后，由不同样品测得之Ag*Ab查标准曲线则可得出其Ag含量。

　　7.IL-6的检测：采用酶联免疫吸附法测定IL-6 的水平，原理为酶标抗体与抗原特异性结合，酶的催化可使无色的底物显色，颜色的深浅与待测抗原量成正比。

　　8.NO的测定：参照文献［3］提供的镀铜镉还原法，操作时加以改良。

    三、结果

　　海洛因依赖者CD、CD+4／CD+8比值、IL-2、IL-6、NO水平的检测结果见附表。静注海洛因者CD+4T细胞数低于正常人，CD+8T细胞数与正常人差异无显著性，CD4／CD8比值倒置，CD+4TH1细胞分泌的IL-2水平降低，而CD+4TH2分泌的IL-6水平却高于对照组，外周血培养上清的NO含量高于对照。
　　
    四、讨论

　　本结果显示，海洛因依赖患者CD+4T细胞数显著低于正常对照、CD+8T细胞数两组之间差异无显著性、CD+4/CD+8比值倒置，提示海洛因依赖者细胞免疫功能受损，与多数报道结果一致［4］。另外还显示海洛因对CD+4TH细胞分泌细胞因子IL-2有抑制作用。Jessop等［5］报道吗啡抑制小鼠脾CD+4TH1细胞分泌的IL-2，且抑制程度与剂量呈正相关。也有人发现，成瘾小鼠IL-2、IL-4水平降低，戒断后IL-4恢复正常，但IL-2仍处于低水平状态［6］。国内也有人报道海洛因依赖者IL-2水平低下［4］，成瘾小鼠IL-2、IL-6水平均降低［7］。因此可已认为，阿片类药物可使CD+4TH1细胞分泌的IL-2水平降低。

　　我们发现，海洛因依赖者外周血培养上清中NO含量显著高于正常人。据报道NO与吗啡耐受有关，NO浓度增高能加速吗啡耐受形成［8］。有研究表明，吗啡能通过增高NO水平来抑制小鼠脾细胞增殖［6］；NO可能与机体炎症反应有关：NO与超氧阴离子反应形成的羟自由基有较强的毒性，引起微循环障碍和气道粘膜损伤脱落，炎性细胞浸润，血浆渗出，粘膜水肿，上皮细胞受损伤、脱落［9］。因此，海洛因依赖患者高水平的NO可能使其易患呼吸系统疾病。

　　CD+4TH细胞可以分化为两个主要亚群CD+4TH1、CD+4TH2，CD+4TH1细胞分泌细胞因子IL-2、IFN-γ，CD+4TH2细胞分泌细胞因子IL-4，IL-6，IL-10等，一种TH细胞产生的细胞因子能下调节其他类型的TH细胞［10］。 TH1能被特异性抗原或丝分裂原如Con-A诱导产生大量的NO，而NO能抑制TH1分泌IL-2、IFN-γ，对IL-4的分泌却不产生影响。本结果显示，海洛因依赖者外周血NO水平增高，可能与海洛因诱导巨噬细胞分泌的NO增加有关。此外，还显示海洛因依赖者外周血IL-2水平降低，可能是由于NO反馈性地抑制TH1功能。海洛因依赖者外周血培养上清的IL-6水平高于正常人，也间接反映了TH1和TH2之间的平衡关系遭到了破坏。对感染性疾病而言，若TH2细胞功能增强，机体处于免疫抑制状态，感染易扩散或转为慢性感染；TH1细胞功能占优势，则能迅速清除体内感染或使感染局限，同时产生免疫耐受［10］。海洛因依赖者CD+4TH2细胞功能增强，可能是其对疾病的易感性增加的主要原因。

    参考文献：

    1 Marion SA, Schechter MT, Weaver MS, et al. Evidence that prior immune dysfunction predisposes to human immunodeficiency virus infection in homosexual men. J AIDS，1989, 2: 178-181.

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