摘要：目的 观察黄芪醇提物对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱(CPP)效应的影响。方法 吗啡6 mg/kg连续给药适应训练6 d,建立小鼠吗啡CPP模型,观察黄芪醇提物对CPP的影响。结果 吗啡可诱导小鼠对伴药箱产生显著的CPP;训练阶段于每次给予吗啡前30 min给予黄芪醇提物200,400和800 mg/kg可拮抗小鼠对吗啡的CPP效应(与吗啡对照组比较P<0.05,P<0.01,P<0.01);测试前30 min一次给予黄芪醇提物800 mg/kg可抑制小鼠已形成的CPP(P<0.01),但黄芪醇提物200和400 mg/kg不影响其效应(P>0.05);且黄芪醇提物自身不会使小鼠产生CPP。结论 黄芪醇提物能在一定程度上抑制吗啡诱导的小鼠CPP效应的形成和表达,其自身无潜在精神依赖性。

    关键词：黄芪 吗啡依赖 疾病模型 动物 小鼠

    阿片类药物依赖包括身体依赖和精神依赖两个方面,后者是导致复吸的主要因素。在临床治疗方面,解除急性戒断症状与克服身体依赖等问题已基本解决,但对精神依赖即脱毒后的心理渴求并导致复吸尚无十分有效的方法,成为目前该领域研究的重点和难点。笔者在前期研究发现丹参提取物可拮抗小鼠吗啡身体依赖性的形成\[1\],并已筛选出有效成分的基础上,拟从其他中药中寻找抗吗啡精神依赖的有效成分,进而与丹参有效成分组成复方,以达到抗吗啡依赖特别是精神依赖的效果。

    中药黄芪具有广泛的药理作用,不仅可用于疲劳、腹泻、厌食、泌尿以及心血管疾病,而且还有催眠、镇静、镇痛、抗焦虑、抗抑郁等作用[2、3],理论上可减轻阿片类成瘾者的失眠抑郁、焦虑烦躁等症状。中医理论认为阿片类物质成瘾的基本病机是正虚而邪实,而黄芪具有补虚升阳、扶助正气的功效,可作为扶正补虚药用于戒毒治疗。据统计,在《中医戒毒辑要》收载的126个戒毒药方中,黄芪使用率达33.02%[4]。近年来临床将黄芪用于戒毒复方中,在脱毒及抗稽延性戒断症状方面均已取得较好的效果[5]。笔者通过条件性位置偏爱(CPP)实验,观察黄芪醇提物对小鼠吗啡精神依赖的影响,为黄芪治疗阿片类精神依赖提供药理学依据,并为进一步分离筛选出黄芪的有效成分、探讨其抗精神依赖的可能机制打下基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物昆明种小鼠(18~22 g),♂,由福建医科大学实验动物中心提供[合格证号:SCXK(闽)20040002]。

    1.1.2 药品盐酸吗啡注射液(沈阳第一制药厂,批号011105),用生理盐水配制成所需浓度;灭菌生理盐水(NS,福州制药厂)。黄芪饮片(福建省回春药业公司),经福建医科大学天然药化教研室鉴定为正品。其余化学试剂均为分析纯。

    黄芪醇提物制备：将黄芪饮片粉碎成粗粉,精密称取100 g,加入70%乙醇600 mL,水浴回流2 h,滤过。滤渣再加入70%乙醇600 mL回流2 h,滤过,合并两次滤液。减压浓缩,浓缩液放置于70 ℃烘箱中烘至恒重,得黄色黏稠浸膏35.625 g。经HPLCELS法测定含0.29%黄芪甲苷。黄芪醇提物用NS溶解后配成所需浓度。

    1.1.3 仪器CPP箱参照文献\[6\]制作,箱体由15 cm×15 cm×15 cm的两个正方体组成,中间有一可活动的隔板,将隔板抽起后,小鼠可在两个箱体之间自由活动。箱体的上方为玻璃板,一侧内面为黑色,底面粗糙(黑箱),另一侧内面为白色,底面光滑(白箱)。

    1.2 方法[7、9]

    1.2.1 预测试 将偏爱箱中间隔板抽出,把小鼠逐只放入箱的中间地带,让其在箱中自由跑动15 min,记录小鼠在各箱停留时间。剔除对箱体某一侧有显著偏爱的小鼠,以排除非CPP对实验结果的影响。结果显示,几乎所有小鼠偏爱黑箱。因此,将白箱作为非偏爱侧即伴药箱。

    1.2.2 黄芪醇提物对CPP效应的影响

    1.2.2.1 CPP模型制作及测定

    将达到实验条件的小鼠随机分为正常对照组、吗啡对照组(6 mg/kg)及黄芪醇提物200,400,800 mg/kg组(各10只)。除了正常对照组两次均皮下注射(sc)NS外,其余各组每天分别sc吗啡6 mg/kg和NS各一次,两次给药间隔8 h(8∶30,16∶30)。用隔板封闭箱内通道。小鼠注射吗啡后置于白箱,注射NS后置于黑箱,时间均为40 min,共训练6 d。在最后一次注射吗啡24 h后进行CPP检测。测试时将隔板抽出,使小鼠能够在箱内自由跑动,逐只放入箱体中间,观察15 min,记录小鼠在白箱的停留时间。

    1.2.2.2 给药方法

    (1)观察药物对吗啡引起的CPP效应形成的影响:给药组每次sc吗啡前30 min分别腹腔注射(ip)不同剂量的黄芪醇提物,正常对照组及吗啡对照组以同样方式注射等容积NS,连续给药6 d。(2)观察药物对已形成的小鼠CPP的影响：在造模的6 d内均不给药,仅在检测前30 min 按设定剂量给予黄芪醇提物。

    1.2.3 黄芪醇提物自身CPP效应的测定

    将小鼠随机分为正常对照组及黄芪醇提物200,400,800 mg/kg组(各10只)。黄芪醇提物组ip,每天1次;对照组等容积NS ip,均连续6 d。黄芪醇提物组注射后置白箱,对照组注射NS后置黑箱,时间均为40 min。给药前和末次给药后24 h逐只观察15 min,记录小鼠在白箱的停留时间。

    1.3 统计学处理

    采用SPSS 11.5统计软件建立和管理数据库。按文献[7]统计CPP得分(给药后在伴药箱停留时间减去给药前在伴药箱停留时间),结果以x±s表示。各组CPP得分经正态性检验,数据均服从正态分布(P>0.05),行组间t检验。

    2 结果

    2.1 黄芪醇提物对吗啡引起的CPP形成的影响

    给药前各组在白箱停留时间差别均无统计学意义(P>0.05),表明实验前动物分组是随机均衡的。训练6 d后,吗啡对照组与正常对照组比较,CPP得分明显增加(P<0.01),说明吗啡(6 mg/kg)可诱导小鼠产生明显的位置偏爱。黄芪醇提物400,800 mg/kg组CPP得分均较吗啡对照组显著降低(P<0.01),且与正常对照组比较无统计学意义(P>0.05);黄芪醇提物200 mg/kg组CPP得分与吗啡对照组比较有较明显的降低(P <0.05),与正常对照组比较也有统计学意义(P<0.01),表明黄芪醇提物可显著抑制吗啡引起的小鼠CPP效应的形成(表1)。黄芪醇提物400和800 mg/kg组的疗效比较无统计学意义(P>0.05),而200 mg/kg组抑制吗啡CPP效应形成的作用不稳定,故初步认为黄芪醇提物的适宜给药剂量为400 mg/kg。福建医科大学学报2006年7月第40卷第4期黄迪等：黄芪醇提物对小鼠吗啡条件性位置偏爱的影响

    2.2 黄芪醇提物对吗啡引起的CPP表达的影响

    给药前各组在白箱停留时间比较无统计学意义(P>0.05)。CPP小鼠给予黄芪醇提物,800 mg/kg组CPP得分与吗啡对照组比较明显缩短(P<0.01);200,400 mg/kg组CPP得分与吗啡对照组比较无统计学意义(P>0.05),提示黄芪醇提物较高剂量对已形成的CPP效应具有一定的抑制作用,低剂量不影响CPP效应的表达(表2)。

    2.3 黄芪醇提物自身CPP检测

    黄芪醇提物各剂量组CPP得分与对照组比较均无统计学意义(P>0.05),初步表明黄芪醇提物不存在自身的精神依赖性,较为安全(表3)。

    3 讨论

    CPP实验是由Katz和Gormenzano于1979年提出的一种判定药物奖赏效应的行为药理学方法。许多研究表明,CPP实验不仅是评价药物依赖性潜力的有效方法,也是研究药物依赖性的神经生物学机制或筛选治疗药物精神依赖的有效药物的方法[10]。表1黄芪醇提物对小鼠条件性位置偏爱效应形成的影响表3黄芪醇提物的自身条件性位置偏爱效应

    本实验表明,黄芪醇提物能显著抑制吗啡诱导的小鼠CPP的形成,对已形成的CPP在高剂量时亦有一定程度的拮抗作用,说明黄芪醇提物具有缓解吗啡精神依赖的作用。在行为学实验中,小鼠的个体差异较大,所得实验结果标准偏差较大,但是从实验结果大致可以判定黄芪中含有缓解小鼠吗啡精神依赖的活性成分。

    γ-氨基丁酸(GABA)是中枢神经系统重要的抑制性递质,许多证据表明GABA能系统地在吗啡的成瘾发展过程中发挥重要作用[11、12]。有研究发现,黄芪对大脑等脏器有保护作用,可通过GABA能神经发挥中枢镇静和镇痛作用,可增加睡眠时间,改善学习和记忆功能,并有抗焦虑和抗抑郁的作用[2、3]。因此,黄芪中的某些成分可能具有GABA受体激动作用,可减轻阿片类成瘾者的失眠抑郁、焦虑烦躁等症状,从而达到缓解精神依赖的作用。此外,兴奋性氨基酸(EAA)、NO等神经递质也参与了吗啡成瘾的形成[13、14]。有研究表明,黄芪可拮抗EAA的兴奋性毒性[15],并能抑制NOS的活性[16]。黄芪对吗啡CPP的作用是否也与这些机制有关,有必要进行进一步的研究。

    本实验结果表明,黄芪的乙醇提取物对吗啡所致的精神依赖在一定程度上具有拮抗作用,并且自身不存在潜在的精神依赖性,这为黄芪用于干预阿片类药物的精神依赖提供了研究线索。黄芪化学成分众多,其活性成分主要有皂苷类、黄酮类和多糖类。本课题组将通过进一步的分离纯化及药效筛选,从黄芪中获得抗吗啡精神依赖的有效部位或活性成分,并在此基础上对黄芪抗吗啡精神依赖的作用机制进行深入的研究,为其用于临床戒毒提供理论依据。

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    基金项目: 福建省自然科学基金资助项目(C0410026), 福建医科大学科学研究发展基金资助项目(01601024)

    作者单位: 福建医科大学, 福州3500041.药学院药理学系; 2.生理学与病理生理学系