摘要   目的：研究二氢埃托啡（DHE）在大鼠的精神依赖性潜力，并探讨DHE偏爱效应的神经解剖基础。方法：采用有倾向性程序的条件性位置偏爱实验模型，给药方法有皮下给药和核团内给药。结果：DHE在0.5 ng·kg－1的微小剂量下，就能产生位置偏爱效应，随着剂量的增加，偏爱程度有所增强。微量DHE分别注射到腹侧被盖区（VTA）和伏隔核（NAc）产生偏爱效应。结论: DHE的精神依赖性非常强大，VTA－NAc通路在DHE偏爱效应中起重要作用。
    关键词  二氢埃托啡； 腹侧被盖区； 伏隔核; 条件性位置偏爱； 大鼠

    条件性位置偏爱（conditioned place preference, CPP）实验是一种评价药物精神依赖性的方法，偏爱效应能较好地反映药物的奖赏效应[1]。大量研究表明,中脑边缘DA系统在药物精神依赖性中起重要作用，其中, 腹侧被盖区（ventral tegmental area, VTA）和伏隔核（nucleus accumbens, NAc）分别是神经元胞体和末梢所在部位,在药物奖赏效应中起关键性作用[2]。

    二氢埃托啡(dihydroetorphine, DHE)是国内合成的阿片镇痛药[3]， 镇痛活性强，精神依赖性亦强[4]。但对其精神依赖性的机理还缺乏研究。本文利用CPP实验模型，选用Wistar大鼠，进一步完善对DHE的精神依赖性评价，并将微量DHE直接注射到VTA和NAc两个不同的核团，以探讨VTA－NAc通路DHE在精神依赖性中的作用。 

1  材料和方法

1.1 材料

      Wistar大鼠，♂，220－270 g，北京医科大学实验动物部提供，分笼饲养，自由进食、饮水。盐酸二氢埃托啡: 北京四环制药厂生产，批号：931229，用生理盐水配制．

1.2 核团给药方法

    大鼠用戊巴比妥钠（40 mg·kg－1, ip）麻醉后固定于立体定位仪（NaRishige，日本）上。按Paxinos和Watson (1986) [5] 的大鼠脑立体定位图谱随机确定一侧核团位置．VTA：前囟后5.8 mm，旁开0.7 mm，颅骨下7.5 mm．NAc：前囟前1.8 mm，旁开1.2 mm，颅骨下6.5 mm，用微型钻打开颅骨，插入不锈钢外套管（外径0.6 mm）, 使外套管下末端在核团上1 mm, 牙科水泥固定, 术后饲养5－7 d。核团注射是通过连接微量注射器的外径为0.3 mm的注射管插入核团内，缓慢注射。注射剂量：1.0 μl·kg－1，速度：0.1 μl·min－1, 注射完毕后留针1 min。实验结束后, 深麻大鼠, 打开颅骨, 经升主动脉灌注4％多聚甲醛200 ml, 先快后慢．然后取出包括注射部位在内的厚约5 mm的脑块, 冰冻切片, Nissl染色, 镜下观察注射部位准确与否。注射部位不准确的实验数据剔除。

1.3 实验装置[6]

    位置偏爱箱（穿梭箱）由有机玻璃做成的黑、白盒构成，大小为44 cm×28 cm×28 cm，中间由可以抽拉的隔板隔开，将穿梭箱分为体积相等的两个空间。其中一盒为黑色，底板光滑；另一盒为白色，底板铺一白色、柔软、有纹理的壁纸。穿梭箱的一面为透明有机玻璃，以便观察。穿梭箱放入具有隔音和通风设备的木制箱内，木制箱内径60 cm×60 cm×50 cm, 六壁均为乳白色，顶部装一5W的白炽灯，使箱内光线强度为20 Lux，箱子正面壁上有一15 cm×20 cm的观察窗，可以从外向内观察。箱子侧面配有线路板和多线平行接口，使动物活动信号能传送到计算机，大鼠在穿梭箱内的活动通过计算机程序自动记录下来。

1.4 实验程序

    本实验采用有倾向性程序，实验分三个阶段进行。第1阶段首先测试大鼠的天然嗜好，在本实验条件下，大鼠对黑盒表现出天然嗜好，所以，后面的训练阶段以白盒为伴药盒。第2阶段为训练阶段，在此期间，用隔板封闭两盒间通道。每只大鼠每天上、下午各注射一次，两次间隔时间为6 h，其中一次为DHE，另一次为NS。给DHE后，将大鼠放入白盒，给NS后，将大鼠放入黑盒，每次在盒中停留40 min。共训练5 d。第3阶段为测试时间，在此阶段，中间隔板抬高12 cm，大鼠不给DHE，也不给NS，将其放入两盒中间，让其自由跑动，启动计算机程序，记录15 min内大鼠分别在两盒内停留的时间。在整个实验过程中，保证光线、色调、气味等环境一致。

1.5 统计分析

    各组动物在伴药盒的时间分别计算均值、标准差，以x±s表示，再做组间t检验，比较组间差异的显著性，如果动物在伴药盒的时间显著延长，则表明产生偏爱效应。

2  结果

2.1  DHE外周给药的偏爱效应

    首先给DHE (5.0 μg·kg－1, sc)，大鼠对伴药盒产生极显著的偏爱效应, 随后将DHE浓度成10 倍的向下稀释, 发现DHE 产生偏爱效应的最小效应量是5 g·kg－1×10－10 g·kg－1(即0.5 ng·kg－1)。 随着剂量的增加，偏爱程度有所增强(图1)。

2.2  DHE直接注入VTA的偏爱效应

    向VTA内注射DHE, 产生偏爱效应, 量效曲线见图2。DHE注入VTA产生偏爱效应的最小效应量是5 g·kg－1×10－13 g·kg－1, 随着剂量的增加，偏爱程度增强, 但在较高的几个剂量组曲线上升并不明显。

2.3  DHE直接注入NAc的偏爱效应

    向NAc内注射DHE, 产生偏爱效应的量效曲线与注入VTA的量效关系相似。最小效应量亦是5 g·kg－1×10－13 g·kg－1(图3)。

3  讨论

      DHE是蒂巴因－东罂粟碱类的强效麻醉性镇痛药，其镇痛效价为吗啡的1万倍左右。从受体结合特性看，DHE对μ、δ和κ受体的相对亲和力为1951:2:1，对μ受体的亲和力比吗啡强上万倍，DHE是μ受体相对选择性激动剂[7]。本文利用CPP实验评价了DHE在大鼠的精神依赖性潜力。皮下给药，DHE在0.5 ng·kg－1的小剂量下就能产生偏爱效应，表明DHE的精神依赖性极强。社会上出现滥用DHE的原因就在于它极强的精神依赖性。这也给人们一个启示，在评价新开发药物的依赖性时，不仅要评价身体依赖性，也要注意评价其精神依赖性，两者结合，才能对药物依赖性有一个全面的认识。

      VTA是中脑边缘DA系统神经元细胞体所在部位,神经纤维向上投射到NAc、嗅结节、隔核、杏仁核等部位, NAc除接受大量来自VTA的神经纤维投射外, 还与其它核团有着广泛的联系。VTA－NAc通路在阿片类奖赏效应中起着重要作用, 而相邻的黑质纹状体DA系统则不参与药物依赖性的形成[8]。将微量DHE直接注射到VTA和NAc, 大鼠产生偏爱效应。说明与其它阿片类相似，VTA－NAc通路也是DHE产生偏爱效应的重要神经解剖基础。

4  参考文献

 1  Hoffman DC. The using of place conditioning in studying the neuropharmacology of drug reinforcement. Brain Res Bull, 1989,23:373－387.

 2  Koob GF. Drugs of abuse: anatomy, pharmacology and function of reward pathways. TIPS, 1992,13:177－184.

 3  秦伯益. 二氢埃托啡从镇痛到戒毒的研究进展. 新药与临床, 1993,12:119－124.

 4  郑继旺, 张开镐. 盐酸二氢埃托啡的精神依赖性. 中国药物依赖性通报, 1995，4:65－69.

 5  Paxions G, Watson C. The rat brain in stereotaxic coordinates. Academic Press, 1986.

 6  任燕华，刘忠华，张开镐. 微机全自动程序控制的条件性位置偏爱实验系统. 中国药物依赖性通报, 1997,6:26－29.

 7  王丹心，黄矛，秦伯益. 二氢埃托啡对大鼠脑阿片受体的结合特性. 中国药理学和毒理学杂志, 1991,5:161－163.

 8  Van der Kooy D, Mucha RF, O'Shaughnessy M, et al. Reinforcing properties of brain microinjections of morphine revealed by conditioned place preference. Brain Res, 1982,243:107－117.

DIHYDROETORPHINE REINFORCEMENT STUDIED BY

CONDITIONED PLACE PREFERENCE IN RATS

  Liu Zhonghua1, Zhang Kaigao2

1(Department of Pharmacology, Binzhou Medical College, Binzhou, 256603)
2(National Institute on Drug Dependence, Beijing Medical University, Beijing, 100083)

ABSRACT  Objective: To study the reinforcing effect and neuroanatomical sites of dihydroetorphine (DHE) by conditioned place preference paradigm in rats. Methods: A biased procedure was used. Rats were injected subcutaneously (sc) or microinjected into ventral tegmental area (VTA) or into nucleus accumbens (NAc). Results: DHE induced dose－related place preference. The minimal effective dose enough to produce place preference is 0.5 ng·kg－1 (sc). Microinjections of DHE into the VTA or NAc repectively, the rats produced place preference. Conclusion: The psychic dependence potency of DHE is extremely strong. The VTA－NAc pathway is important in mediating the place preference of DHE.
KEY WORDS  dihydroetorphine; ventral tegmental area; nucleus accumbens; conditioned place preference; rat

修回日期： 1998－02－16
 

中国药物依赖性杂志

1999年 第8卷 第1期